f-^*^.-*-^^ '■*"^f^. '^^^^^ ZEITSCHRIFT ' FÜR WISSENSCHAFTLICHE MIKROSKOPIE UND FÜR MIKROSKOPISCHE TECHNIK BEGRÜNDET VON W. J. BEHRENS Unter besonderer Mitwirkung von Prof. Dr. Paul Scliiefferdecker und Dr. E. Sommerfeldt in Bonn ni Tübingen herausgegeben von Dr. ernst Küster in Halle a. S. Band XXIII (Jahrgang 1906) Mit 1 Steindrucktafel und 101 Holzschnitten LEIPZIG Verlag von S. H i r z e I 1906 Alle Rechte vorbehalten. ;? ^x Inhaltsverzeichnis. I. Abhandlungen. Seite Baläzsy, D., Zur Glimmertechnik 12 Bender, O., Ein einfacher Beleuchtungsapparat für Lupenpräparation und Mikroskopie 35 Best, F., Über Karminfärbung des Glykogens und der Kerne . . . 319 Detto, C, Ein neues Gleitlineal 301 Freund, H., Neuer Apparat zur Massenfärbung mikroskopischer Prä- parate von F. Hellige & Co 197 Gaidukov, N., Die neuen Zeißschen Mikroskope 59 Gälesescu, P. , Une nouvelle methode pour colorer les gramilations du bacille diphterique 67 Glasenapp, M., Die Bedeutung der Spitzertypie für die Reproduktion von Mikrophotographien 174 Greil, A., Über die Verwendung des Nernstschen Glühlichtes in bio- logischen Laboratorien nebst Bemerkungen über die photo- graphische Aufnahme von Embryonen 257 — , — , Ein neuer Entwässerungsapparat 286 Hansen, F. C. C. , Einige Farbfilter, sowie einige histologische Fär- bungen für mikrophotographische Aufnahmen 410 Helly, K., Zur Technik der Wasseraufklebung von Paraffinschnitten 330 Huber, G. €., On a rapid Method of preparing large Numbers of Sections 187 Kaiserling, C, Ein neues Modell eines Universal -Projektionsapparates (E. Leitz, Wetzlar) 440 Lebrun, H. , Application de la methode des disques rotatifs ä la technique microscopique 145 Lindemann, W., Ein neuer Apparat für Injektionszwecke .... 427 Mencl, E. , Über ein neues praktisches Alkoholometer für Präpara- tionszwecke 423 Metz, C. , Neuere Vervollkommnungen der Leitzschen Mikroskop- Stative 430 Olt, Das Aufkleben mikroskopischer Schnitte 323 Pauly, A., Ein einfaches Kompensatorokular 38 Pohlman, A. G., Ein neues Projektionszeichenbrett 41 IV Inhaltsverzeichnis. Seit» Prowazek, S., Technik der Spirochäte -Untersuchung 1 Röthig, P., Wechselbeziehung zwischen metachromatischer Kern- und Protoplasmafärbung der Ganglienzelle und dem Wassergelialt alkoliolischer Hämatoxylinlösungen 316 Schneider, J. , u. Kunzl, G. , Spinnfasern und Färbungen im Ultra- mikroskope 393^ Schorr, G. , Ein neues Modell eines einfachen beweglichen Objekt- tisches 425 Sommerfeldt, E., Mikroskopische Beobachtungen über Bildungsweise und Auflösung der Kristalle 26 Steinach, E., Ein neues Mikroskop -Stativ 308 Stoeltzner, H., Der Einfluß der Fixierung auf das Volumen der Organe 14 Stoeltzner, W., Eine einfache Methode der Markscheidenfärbung . . 329 Studnicka, F. K., Über die Anwendung der Methode von Bielschowsky zur Imprägnation von Bindegewebsfibrillen besonders im Knochen, Dentin und Hyalinknorpel 414 Tischutkin , N. P. , Beschreibung eines Apparates für gleichzeitige Bearbeitung vieler mikroskopischer Schnitte und über An- wendung desselben für Bearbeitung feiner histologischer Ob- jekte (Embryonen, Eier etc.) 45 Tobler, F., Über die Brauchbarkeit von Mangins Rutheniumrot als Reagens für Pektinstoffe 182 Tomaselli, A. , Una modificazione al metodo del Donaggio, per la colorazione delle cellule nervöse 421 Vecchi, B. de, La Fotossilina sciolta in Alcool raetilico come mezzo d'inclusione 312 II. Referate. Anzilotti, J., Über ein besonderes Kulturverfahren für den Tuberkel- bazillus auf Kartofi'eln 483 Arnold, J., Die Morphologie der Milch- und Colostrumsekretion, sowie deren Beziehung zur Fettsynthese, Fettphagocytose , Fett- sekretion und Fettdegeneration - .... 214 Athias, La vacuolisation des cellules des ganglions spinaux chez les animaux a l'etat normal 352 Babucke, Zur schnellen Filtration des Nähragars 484 Baclimanu, H., Botanische Untersuchungen des Merwaldstätter Sees. 2. Chlamydomonas als Epiphyt auf Anabaena flos aquae Ralfs 110 Bauer, M., Wurfschlacken und Lava der Vesuveruption von 190G . 241 Baumann, E., Beiträge zur Unterscheidung der Streptokokken . . 226 Beiliug, K., Beiträge zur makroskopischen und mikroskopischen Ana- tomie der Vagina und des Uterus der Säugetiere 222 Bell, J. F., A simple method of filtering agar 232 Berger, F. R. M., Zur Färbung der Spirochaete pallida 224 * Inhaltaverzeiclinis. y Seite Bergey, D. H. , Untersuchungen über die färbenden Eigenschaften mit besonderer Berücksichtigung der Gram sehen Methode. . 485 Bertarelli, E., Über die Färbung und die Gegenwart der Spirochäte Obermeyers in den Organschnitten der an Rückfallfieber verstorbenen Individuen 362 — , — , „Spirochaete pallida" und Osteochondritis 363 Bertarelli, E., u. Volpino, G., Weitere Untersuchungen über die Gegenwart der Spirochaete pallida in den Schnitten primärer, sekundärer und tertiärer Syphilis 231 Bertarelli, E., Volpino, G. , u. Bovero, R., Untersuchungen über die Spirochaete pallida Schaudinn bei Syphilis 231 Bethe, A., Die Einwirkung von Säuren und Alkalien auf die Fär- bung und Färbbarkeit tierischer Gewebe 73 Biedert, Über die Biedert sehe (Mühlhäuser -CzAPLEWsKischej Me- thode zum Auffinden vereinzelter Tuberkelbazillen .... 232. Bielscliowsky, M., Die Darstellung der Achsenzylinder peripheri- scher Nervenfasern und der Achsenzylinder zentraler mark- haltiger Nervenfasern. Ein Nachtrag zu der von mir an- gegebenen Imprägnationsmethode der Neurofibrillen .... 97 Biernacki, V., Über einen Halbschattenanalysator 120 Biske, F., Quarzkeilkolorimeter 123 Blackmau, V. H., a. Fräser, H. C, J., On the sexuality and deve- lopment of the ascocarp of Humaria granulata Quel. . . . 238 — , — , — , — , Further studies on the sexuality of the Uredineae . . 117 Blumen thal, J. M. , u. Lii)skerow, M., Vergleichende Bewertung der ditterentiellen Methoden zur Färbung des Diphtheriebacillus 360 Bohne, Beitrag zur diagnostischen Verwertbarkeit der Negri sehen Körperchen 464 Brand, F., Über die Faserstruktur der Cladophoramembran .... 108 Brandeis, R. , Sur un procede nouveau de coloration des cuupes histologiques par l'azorubine alunee 454 Braun , F. , Optische Doppelbrechung in isotropen , geschichteten Medien 121 Brauns, R. , Vesuvasche an der Ostsee. Gips in der in Italien ge- fallenen Vesuvasche. Salzkruste auf frischer Vesuvasche . . 241 Bronstein, J., Zur Technik der Serumgewinnung 487 Brunk, A., Über die Acetonanwendung zur Paraffineinbcttung, be- sonders zu einer einfachen Schnelleinbettungsmetliode . . . 200 Buerger , L. , Eine neue Methode zur Kapselfärbung der Bakterien ; zugleich ein Beitrag zur Morphologie und Differenzierung einiger eingekapselter Organismen 227 Bütschli, 0., Beiträge zur Kenntnis des Paramylons 492 — , — , Über die Skelettnadeln der Kalkschwämme 342 Cache, Ar., Über die Frage der bakteriologischen Technik .... 366 Cash, J., The British Freshwater Rhizopoda and Heliozoa .... 82 €aullery, M., et Chappellier, A., Un procede commode pour inclure dans la paraffine des objets microscopiques 336 VI Inhaltsverzeichnis. Seite Cavalie, M., Sur quelques points de la structure de l'organe electrique [Torpedo Galvani] 221 Cesa-Bianchi, D., Über das Vorkommen besonderer Gebilde in den Eiern mancher Säugetiere 222 Charlier, A., Contributions ä 1' etude anatomique des plantes ä gutta- percha et d'autres Sapotacees 109 Christman, A. K., Observations on the wintering of grain rusts . 374 Clevenger, J. F., Hydrofluoric Acid for marking Slides 72 Cori, C. J., Das Blutgefäßsystem des jungen Ammocoetes .... 461 Cotton, A., et Meuten H., Les Ultraraicroscopes et les objets ultra- microscopiques 451 Curtis, F., Methode de coloration elective du tissu conjonctif . . . 349 Czaplewskl, Demonstration zur Technik der Typhusdiagnose . . . 482 Daimler, K., Vergleichende Untersuchungen über die Pylorusdrüsen- zone des Magens und die Duodenaldrüsenzone des Darmkanals der Haussäugetiere 91 Dixen, W, E., a. Inchley, O., The Cihoscribe, an Instrument for re- cording the activitj^ of cilia 74 Dogiel, A., Zur Frage über den fibrillären Bau der Sehnenspindeln oder der GoLGischen Körperchen (organo .nervoso terminale musculo-tendineo) 358 Downing, E. R., The Spermatogenesis of Hydra 462 Drigalski, v., Ein Schnellfilter für Agarlösungen 362 Drude, P., Lehrbuch der Optik 449 Duckwall, Ed. W. , Demonstration von Geißeln beweglicher Bak- terien und eine einfache Methode Mikrophotographien her- zustellen 235 Dudgeon, The staining reactions of the Spirochaete found in syphilitic lesions 233 Duparc, L., u. Pearce, F., Über die Auslöschungswinkel der Flächen einer Zone 242 Fasoli, G., Über die feinere Struktur des Knochengewebes .... 88 Fernandez, M., Zur Kenntnis des Pericardkörpers einiger Ascidien 340 Fick, J., Aufklebemethode oder Schälchenmethode bei der Färbung von Paraffinschnitten 203 Fischel, R., Zur Technik der Kromayer sehen Epithelfärbung . . 347 Foa , P. , Sopra la colorazione dei bacilli del tifo nei tessuti e sulla rigenerazione della polpa splenica nei tifosi 233 Förster, A simple method for the enumeration of organisms in any fluid 233 Forster, J., Über ein Verfahren zum Nachweis von Milzbrandbazillen in Blut und Geweben 483 Freidenfelt, T., Über den feineren Bau des Visceralganglions von Anodonta 472 Freund, H. W., u. Theme, R., Eierstockschwangerschaft .... 359 Fuchs, R. F., Physiologisches Praktikum für Mediziner 453 Gaehtgens, W., Über die Erhöhung der Leistungsfähigkeit des Endo sehen Fuchsinagars durch den Zusatz von Koffein . . 229 Inhaltsverzeichnis. VII Seite Gaidukov, N., Über Untersuchungen mit Hilfe des Ultramikroskopes nach Siedentopf 107 — , — , Weitere Untersuchuns^en mit Hilfe des Ultramikroskopes nach Siedentopf 107 Gallaud, J., Etudes sur les Mycorrhizes endotrophes 114 Gardner, M., Notizen über die Bildung des Knochengewebes . . . 216 Gastine, G., Sur un nouveau procede d'analyse microscopique des tarines et la recherche du riz dans les farines de ble . . . 493 Gilbert, A., et Jomier, J. , Note sur la coloration des granulations graisseuses du sang . 83 Glaser, O, C, Über den Kannibalismus bei Fasciolaria tulipa (var. distans) und deren larvale Exkretionsorgane 75 Gleichen, A., Leitfaden der praktischen Optik 450 Graber, H. v., Eine Bleidose für die mikrochemische Silikatanalyse . 124 Gräfe, E., Beiträge zur Entwicklung der Urniere und ihrer Gefäße beim Hühnchen 474* Gräfe, V., Über ein neues spezifisches Formaldehydreagens .... 369 Grawitz, E., u. Grüneberg, Die Zellen des menschlichen Blutes im ultravioletten Lichte 342 Günther, C, Einführung in das Studium der Bakteriologie mit be- sonderer Berücksichtigung der mikroskopischen Technik . . 224 Guertler, W., u. Tammann, G., Über die Legierungen des Nickels und Kobalts mit Eisen 125 — , — , — , — , Über die Verbindungen des Eisens und Siliciums . . 125 Guillemard, A. , La culture des microbes anaerobics, appliquee ä l'analyse des eaux. Le rapport aerobic-anaerobic criterium du contage 488 Guiliiermond, A., Contribution ä l'etude cytologique des Cyanophycees 496 Gurwitsch, A., Über die Zerstörbarkeit des Protoplasmas im Echino- dermenei 211 Guyot, G., Über das Verhalten der elastischen Fasern bei Aleuronat- pleuritis. Ein Beitrag zur Histogenese der elastischen Fasern 219 Habermann, A., Der Fadenapparat in den Synergiden der Angiospermen 496 Hamburger, H. J., Eine Methode zur Bestimmung des osmotischen Druckes sehr geringer Flüssigkeitsmengen 332 Hastings, T. W. , A method for preparing a permanent Nocht's stain [NocHT- Jenner stain] ' 205 Heim, L., Über Asbestfilter 481 Hendrich, A. , Vergleichende makroskopische und mikroskopische Untersuchungen über die Samenblasen und die Ampullen der Samenleiter bei den Haussäugetieren, mit Einschluß von Hirsch und Rehbock 222 Herrera, A.-L. , Notions generales de Biologie et de Plasmogenie comparees 71 Homburger, A., Über die Gründe der mangelhaften Haltbarkeit und die Wiederherstellung abgeblaßter Weigert scher Neuroglia- präparate 204 VIII Inhaltsverzeichnis. Seite Hiimphrey, H. B. , The development of Fossombronia longiseta AusT .117 Huß, H. A. , Beiträge zur Morphologie und Physiologie der Anti- poden 495 Inada, R. , Experimentelle Untersuchungen über die Form der Herz- muskelkerne und Bemerkungen über das Verhalten der Aorta bei experimentell erzeugter Insuffizienz der Aortenklappen . 85 Ikeda, K., Über das Epithel im Nebenhoden des Menschen .... 476 Jones, C. P,, Notes on the microscopical examination of bone marrow S(i Jordan, H., Die physiologische Morphologie der Verdauungsorgane bei Aphrodite aculeata 76 Jouliaud, L., Variations du titre des Solutions de sublime employees pour fixer le sang dans les etats pathologiques 213 — , — , Procedes pour evaluer la fixation süffisante du sang humain dans les Solutions aqueuses de sublime 83 Jouvenel, F., Repartition des glandes de l'estomac chez un supplicie. Presence de glandes de LiEBERKtJHN 91 Jiiel, H. O., Die Tetraden - Teilungen bei Taraxacum und andern Cichorieen 115 Katz, J., Über Mikrophotographie 71 Kiralyfl, G., Über den Wert der Malachitgrünnährböden zur Differen- zierung der Typhus- und Colibazillen 482 Klein, C, Studien über Meteoriten, vorgenommen auf Grund des Materials der Sammlung der Universität Berlin 242 Koch , A. , Jahresbericht über die Fortschritte in der Lehre von den Gärungsorganismen (1903) 106 Köruicke, M., Zentrosomen bei Angiospermen ? Zugleich ein Beitrag zur Kenntnis der generativen Elemente im Pollenschlauch . . 374 Kolmer, W., Zur Kenntnis des Verhaltens der Neurofibrillen an der Peripherie 93 Koltzoff, N. K., Studien über die Gestalt der Zelle. 1. Untersuchungen über die Spermien der Decapoden, als Einleitung in das Problem der Zellgestalt 210 Korff, K. V., Die Entwicklung der Zahnbeingrundsubstanz der Säugetiere 351 Kraskovits, G., Ein Beitrag zur Kenntnis der Zellteilungsvorgänge bei Oedogonium 113 Krauß, F., Der Zusammenhang zwischen Epidermis und Cutis bei Sauriern und Krokodilen 348 Kretschmer, F., Die Leptochlorite der mährisch -schlesischen Schal- steinformation 240 Lagerheim, G., Färgadt kaffe och des undersökning 115 Lang, P., Über den Bau der Hydrachnidenaugen 462 Lapinsky, M., Zur Frage über die Beteiligung der Nervenstämme der hinteren Extremität an der vasomotorischen Innervation der distalen Gebiete derselben und über die Veränderung der vasomotorischen Elemente, sowie der Gefäße selbst der Hinterpfote nach Beschädigung des N. ischiadicus . . . . . 351 Inhaltsverzeichnis. IX Seite Lehmann, O., Die Kontinuität der Aggregatzustünde und die flüssigen Kristalle 377 — , — , Die Struktur der scheinbar lebenden Kristalle 378 — . — , Scheinbar lebende fließende Kristalle 379 — , — , Drehung der Polarisationsebene und der Absorptionsrichtung bei flüssigen Ki-istallen 121 — . — , Die Gleichgewichtsfonn fester und flüssiger Kristalle .... 120 — , — , Näherungsweise Bestimmung der Doppelbrechung fester und flüssiger Kristalle 120 Leonto witsch, A., Zur Frage nach der intravitalen Färbung der Nerven 101 Leszcynski, R. v., Eine klinische diflPerentielle Methode der Gono- kokkenfärbung 366 Levaditi, C, L'histologie pathologique de la syphilis hereditaire dans ses rapports avec le „Spirochaete pallida" 363 Leviu, M., u. Tammann, G., Über Mangan -Eisenlegierungen . . . 122 Löwenthal, W., Weitere Untersuchungen an Chytridiaceen . . . 493 London, E. S., u. Pesker, D, J., Über die Entwicklung des peri- pheren Nervensystems bei Säugetieren 471 Longcope, Warfleid, T. , Eine Studie über das Knochenmark bei Typhus und anderen akuten Infektionskrankheiten .... 364 Lopriore, G., Über die Vielkernigkeit der Pollenkörner und Pollen- schläuche von Araucaria Bidwillii Hook 112 LorchjW., Ein Apparat zur schnellen Reinigung beliebig großer Mengen von Sand und Kies 337 Lugaro, E., Sulla struttura del cilindrasse 100 Lurje, M., Über die Pneumatisation des Taubenschädels 468 MacNeal, W. J., A note on methylene violet as one of the nuclear dyes in the Ramanowsky stain 455 Marceau, F., Recherches sur la structure du cojur chez les Mollusques suivies d'une etude speciale des cceurs branchiaux et de leurs appendices glandulaires chez les cephalopodes 459 Marchall, W. S., a. Dernehl, P. H., Contributions toward the Em- bryology and Anatomy of PoHstes pallipes (Hymenopteron). 1) The Formation of the Blastoderm and the first Arrange- ment of its Cells 75 Marchoux, E,, et Simond, P.-L. , Etudes sur la fievre jaune. Troi- sieme memoire 463 — , — -, — , — , Etudes sur la fievre jaune. Quatrieme memoire . . 463 Marcinowski , K., Zur Entstehung der Gefäßendothelien und des Blutes bei Amphibien 345 Marcus, H., Ein Beitrag zur Kenntnis der Blutbildung bei Knochen- fischen 84 Marechal, J., Über die morphologische Entwicklung der Chromo- somen im Keimbläschen des Selachiereies 103 Maresch, R. , Über Gitterfasern der Leber und die Verwendbarkeit der Methode Bielschowskys zur Darstellung feinster Binde- gewebsfibrillen 356 X Inhaltsverzeichnis. Seite Marschall, F., Die Bedeutung des Endo sehen Nährbodens für die bakteriologische Typhusdiagnose 365 Martini, E., Beobachtungen an Arcella vulgaris 82 Martini, J., Beiträge zur Kenntnis des Quarzes 124 Maximow, A., Über die Zellfonnen des lockeren Bindegewebes . . 217 — , — , Über entzündliche Bindegewebsneubildung beim Axolotl . . 467 Meigen, W., Beiträge zur Kenntnis des kohlensauren Kalkes . . . 126 Mencl, E., Einige Beobachtungen über die Roncoroni sehen Fibrillen der Nervenzellenkerne 472 Merriman, M. L., Nuclear division in Zygnema 116 Merton, H., Über die Retina von Nautilus und einigen di1)ranchiaten Cephalopoden 78 Miehe, H., Wachstum, Regeneration und Polarität isolierter Zellen . 115 Mikosch, K. , Untersuchungen über die Entstehung des Kirsch- gummis 491 Milch, Über magmatische Resorption und porphyrische Struktur . . 124 Miller, W. S., The blood- and lymph vessels of the lung of Necturus maculatus 344 M'Ilroy, a. Hamilton , J. , On the presence of elastic fibres in the Cornea 473 Moisescu, N., Kleine Mitteilung über die Anwendung des horizontalen Mikroskopes zur Bestimmung der Reaktionszeit 114 Molisch, H., Untersuchungen über das Phykocyan 375 Monti , Ed. , Osservazioni e critiche sperimentali sul metodo di V. Drioalski-Conradi per le ricerche del bacilli del tifo nelle feci 234 Mügge, 0., Abreißungsfiguren am Kalkspat 124 Mühlens, P., u. Hartmann, M., Zur Kenntnis des Vaccineerregers . 232 Müller, H., Über die Metakutisierung der Wurzelspitze und über die verkorkten Scheiden in den Achsen der Monokotyledonen . . 236 Müller, J., Zur vergleichenden Histologie der Lungen unserer Haus- säugetiere 475 Müller, O. , Über den Nachweis von Typhusbazillen im Trinkwasser mittels chemischer Fällungsmethoden, insbesondere durch Fäl- lung mit Eisenoxychlorid 368 Nabias, R. de, Methode de coloration au chlorure d'or. Action reductrice de la lumiere et des acides gras 334 — , — , Les anilines substituees et les composes phenoliques comme agents de virage de l'or dans les tissus 334 Nakai Motokichi, Über die Entwicklung der elastischen Fasern im Organismus und ihre Beziehungen zu der Gewebsfunktion . . 86 Nakamura, S., Über die Dispersion der optischen Symmetrieachse im durchsichtigen monoklinischen optisch inaktiven Kristall . . 122 — , — , Über einen (^uarzhalbschattenappai-at 123 Nemec, B., Über inverse Tinktion 493 Nemilow, A., Zur Frage über den Bau der Fettzellen bei Acipenser ruthenus 467 Inhaltsverzeichnis. XI Seite Nestler, A., Myelin und Eiweißkristalle in der Frucht von Capsicum anmium 373 Nowikoff , M. , Untersuchungen über den Bau der Limnadia lenti- cularis L 77 — , — , Über die Augen und die Frontalorgane der Branchiopoden . 80 Nuttall, G. H. F., a. Inchley, O., An improved method of measuring the amount of precipitum in connection with tests with pre- cipitating antisera 368 Ogawa, M. , Über die Färbemethode der Tuberkel- und Lepra- bazillen 485 Oltmanns, Fr., Morphologie und Biologie der Algen 376 Oxner, M. , Über die Kolbenzellen in der Epidermis der Fische: ihre Form, Verteilung, Entstehung und Bedeutung ...... 346 Pacaut, M., et Vigier, P., Les glandes salivaires de l'escargot (Helix pomatia L.). Anatomie, Physiologie. Contribution ä l'histo- physiologie glandulaire 457 Pauly, A., Zur mikroskopischen Charakterisierung des Sarkolith . . 242 Pearce, Über die optischen Eigenschaften der Kristalle im konver- genten polarisierten Lichte 119 Peltrisot, C. N. , Observations pratiques sur la recherche du bacille tuberculeux dans les crachats 369 Peter, K., Die Methoden der Rekonstruktion 453 Pezopoulo, N. , u. Cardamati, J. P. , Die Malaria in Athen. Eine biologische und histologische Studie über die Malariaplas- modien 465 Pietsohmann , V. , Zur Kenntnis des Axialorgans und der ventralen Bluträume der Asteriden 459 Pockels, E., Lehrbuch der Kristalloptik 239 Pohl, H. , Über den feineren Bau des Genitalsystems von Polycera quadrilineata 462 Portier , P. , et Richard, J. , Sur une methode de prelevement de l'eau de mer destinee aux etudes bacteriologiques 487 Prausnitz, Zur Frage der Differenzierbarkeit von Cholera und cholera- älinlichen Vibrionen mittels des Blutagars 367 Raciborski, M., Beiträge zur botanischen Mikrochemie 489 Radaseh , H. E. , Ein Beitrag zur Gestalt der roten Blutkörperchen beim Menschen ' 466 Ramlow, G., Zur Entwicklungsgeschichte von Thelebolus stercoreus Tode 237 Ramström, 31., Untersuchungen über die Nerven des Diaphragma . 471 — , — , Untersuchungen und Studien über die Innervation des Peri- toneum der vorderen Bauchwand 353 Reichensperger, A., Zur Anatomie von Pentacrinus decorus Wy. Th. 341 Reiff, H. H. J,, Ein Polarisator ohne Richtungsänderung und ohne Achsenverschiebung des Lichtstrahles 497 Remlinger, Une cause d'erreur dans l'etude des organismes ultra- microscopiques 485 XII Inhaltsverzeichnis. Seita Retterer, E., Structure et histogenese de l'os 87 Retzius, G. , Über die Spermien der Fucaceen 375 Reuschel , Fr. , Die einfachste Methode der Anaerobenzüchtung in fliissig'em Nährboden 225 Riesenfeld, E. H., u. Wohlers, H. E., Ein neuer Spektralbrenner . 497 Roewer, C. F., Beiträge zur Histogenese von Cercariaeum helicis . 340 Rohr, M. V., Die optischen Instrumente 70 Rosenblat, St., Zur Kenntnis der zur Gruppe der Tuberkelbazillen gehörenden säurefesten Mikroorganismen lOG Rothmann, E. A. , Über das Wachstum der Gonokokken auf dem Fleischwasseragar 367 Rubaschkin , W. , Über doppelte und f)olymorphe Kerne in Triton- blastomeren 105 — , — , Über die Reifungs- und Befruchtungsprozesse des Meerschwein- cheneies 360 Russell, W. , Recherches experimentales sur les principes actifs de la Garance 113 Rüzicka, V,, Cytologische Untersuchungen über die roten Blut- körperchen 342 Saame, O., Über Kernverschmelzung bei der karyokinetischen Kern- teilung im protoplasraatischen Wandbelag des Embryosackes von Fritiilaria imperialis 238 Sainmont, G. , Recherches relatives ä l'organogenese du testicule et de l'ovaire chez le chat 478 Sanzo , L. , Impicgo dell'elettrolisi nella impregnazione metallica e nella colorazione dei tessuti 73 Schaffuit, Beiträge zur Anatomie der Akanthaceensamen 113 Schaller, W. T., Über Dumortiertit 376 Schaben, L. , Beiträge zur Kenntnis des Spermatozoons von Ascaris megalocephala 79 Scheller, R., Beiträge zur Diagnose und Epidemiologie der Diphthe- ritis 230 Schlater, G., Histologische Untersuchungen über das Muskelgewebe. 1. Die Myofibrille des Hühner embryos 85 Schmid, Ed., Beiträge zur Entwicklungsgeschichte der Scrophu- lariaceen 372 Schmidt, V., Studien über Ovogenese. I. Die Wachstumsperiode der Eier von Proteus anguineus 102 Schöufeldt, H. v., Über das Fixieren gelegter Diatomeen .... 116 Schridde, H. , Die Darstellung der Leukocytenkörnelungen im Ge- webe 213 — , — , Die Protoplasmafasern der menschlichen Epidermiszellen . . 471 Schiiltze, O., Beiträge zur Histogenese des Nervensystems. 1. Über die multicelluläre Entstehung der peripheren sensiblen Nerven- faser und das Vorhandensein eines allgemeinen Endnetzes sen- sibler Neuroblasten bei Amphibienlarven 94 Inhaltsverzeichnis. XllI Seite Sch weidler, J. H. , Die systematische Bedeutung der Eiweiß- oder Mj-rosinzellen der Cruciferen nebst Beiträgen zu ihrer anatomisch- physiologischen Kenntnis 113 Siedentopf, H. , Über ein neues physil^alisch- chemisches Mikroskop [Mikroskopie bei hohen Temperaturen] 497 Simon et Spillmaun, L. , Application de la Photographie ä hi nume- ration des eleiuents figures du sang 71 Sitsen, A. E., Erfahrungen über Aceton-Paraffin-Einbettung . . . 202 Smreker, E., Über die Form der Schmelzprismen menschlicher Zähne und die Kittsubstanz des Schmelzes 90 Söllner, J., Über das Vorkommen und die Verbreitung von Aenig- matit in basaltischen Gesteinen 243 Sommerfeldt, E., Ein neuer Typus optisch zweiachsiger Kristalle . 127 — , — , Einige Anwendungen der stereographischen Projektion . . . 121 — , — , Über die Struktur der optisch-aktiven monoklinhemiedrischen Kristalle 243 — , — , Geometrische Kristallographie 119 — , — , Zur Theorie der optisch zweiachsigen Kristalle mit Drehungs- vermögen 376 — , — , Diagramme der regelmäßigen Punktsysteme 378 Soukhanoff, S., Geier, F., et Gourevitch, M., Contribution ä l'etude de l'aspect externe des prolongements protoplasraatiques des cellules nerveuses colores par le bleu de methylene .- . . . 97 Sperlich, A. , Die Zellkernkristalloide von Alectorolophus. Ein Bei- trag zur Kenntnis der physiologischen Bedeutung dieser Kern- inhaltskörper 108 Spillmann , J. , Zur Anatomie und Histologie des Herzens und der Hauptarterien des Diotokardier 339 Stark, M., Zusammenhang des Winkels der optischen Achsen mit dem Verhältnis von Forsterit und Fayalit- Silikat beim Olivin . . 123 Stern, S., Über Sehpurpurtixation 221 Stockard, Ch. R., Cytological changes accompanying secretion in the nectar-glands of Vicia Faba 237 Stopes, M. C, a. Fujii, K., The nutritive relations of the surrounding tissues to the Arcliegonia in Gymnosperms 372 Stromer, E., Bemerkungen über Protozoen 212 Stromsten, F. A., A contribution to the anatomy and development of the venous System of Chelonia 216 Tellyesniczky , K. , Die Erklärung einer histologisclien Täuschung, der sogenannten Kopulation der Spermien und der Sertoli sehen Elemente . 479 Thon, K., Neue Exkretionsorgane bei der Hydrachnidenfamilie Limno- charidae Kramer 81 Tischler, G. , Über die Entwicklung des Pollens und der Tapeten- zellen bei Ribes-Hybriden 118 Trapani, Di un nuovo metodo per ditferenziare il bacillo di Eberth dai bacilli eberthiformi e dal coli 234 XIV Inhaltsverzeichnis. Seite Tretjakoif, D., Die Bildung von Richtungskörperchen in den Eiern von Ascaris megalocephala 338 Tschassownikow , S. , Über die histologischen Veränderungen der Bauchspeicheldrüse nach Unterbindung des Ausführungsganges. Zur Frage über den Bau und die Bedeutung der Langer- hans sehen Inseln 473 Tswett, M., Zur Ultramikroskopie 199 Venema, T. A., Über eine Anreicherung von Bacterium coli in Wasser 484 Vejdovsky, F., Zur Hämocöltheorie 339 Völker , O. , Über die Histogenese des Corpus luteum beim Ziesel [Spermophilus cit.] 223 Vogel, R., Über Gold-Zinnlegierungen 122 Voß, F., Über den Thorax von Gryllus domesticus, mit besonderer Berücksichtigung des Flügelgelenkes und dessen Bewegung. I. Teil 76 Wallgren, A. , Zur mikroskopischen Anatomie der Tubenschwanger- schaft beim Menschen 103 Wederhake, Zum Bau und zur Histogenese der menschlichen Samen- zellen 104 Weinscheuk, E., Anleitung zum Gebrauch des Polarisationsmikro- skops 126 Weleminsky, F., Über Züchtung von Mikrorganismen in strömenden Nährböden 480 Westenrijk, N. van, Über die bipolare Färbung der Pestmikroben 486 Weysse, A. W. u. Burgess, W. S., Histogenesis of the Retina . . 473 Widakowich, V., Über Bau und Funktion des Nidamentalorgans von Scyllium canicula 91 Wielowieyski, H. von, Weitere Untersuchungen über die Morpho- logie und Entwicklungsgeschichte des Insektenovariums . . 460 Wittmaack , K. , Über Markscheidendarstellung und den Nachweis von Markhüllen der Ganglienzellen im Acusticus 93 Wright, F. E., The Determination of the Feldspars by means of their refractive Indices 240 Wolff, G. P. , Beiträge zur Entwicklungsgeschichte der Flechten- apothecien 370 Wulff, Th. , Plasmodesmenstudien 110 Zambouiui, F., Einige Bemerkungen über die optischen Eigen- schaften des Melanophlogits 377 Zopf, W., Vielkernigkeit großer Flechtensporen 115 Zwack, A. , Der feinere Bau und die Bildung des Ephippiums von Daphnia hyalina Leydig 82 Zwintz, J. , u. Thien, O., Über einen neuen, elektrisch heizbaren Objekttisch für Mikroskope 332 Verzeichnis der Mitarbeiter an Band XXIll. D. Baläzsy in Budapest. Dr. 0. Bender in Heidelberg. Dr. E. A. Bessey in Miami (Florida). Prof. Dr. F. Best in Dresden. Dr. C. Detto in Jena- Leipzig. H. Freund in Halle a. S. Dr. N. Gaidukov in Kiew. Dr. P. Gälesescu in Bukarest. Prof. Dr. Garten in Leipzig. Prof. M. Glasenapp in Riga. Dr. A. Greil in Innsbruck. Prof. Dr. F. C. C. Hansen in Kopenhagen. Dr. K. Kelly in Wien. Dr. 0. Henker in Jena. Dr. W. Hoffmann in Berlin. Prof. G. C. Huber in Ann Arbor (Michigan). Prof. Dr. C. Kaiserling in Berlin. Dr. E. Küster in Halle a. S. G. Kunzl in Prag. Dr. H. Lebrun in Brüssel. Dr. 0. Levy in Kiel. Prof. Dr. W. Lindemann in Kiew. XVI Verzeichnis der Mitarbeiter an Band XXIII. Dr. F. Mencl in Prag, Dr. C. Metz in Wetzlar. Prof. Dr. Olt in Gießen. A. Pauly in Wien. Prof. Dr. Gr. Pohlman in Blooniington (Ind.). Dr. S. Prowazek in Berlin. Dr. P. Röthig in Berlin. Prof. Dr. P. Scbiefferdecker in Bonn. Dr. J. Schneider in Prag. Dr. E. Schoebel in Neapel. Dr. G. Schorr in Petersburg. Dr. E. Sommerfeldt in Tübingen. Prof. Dr. E. Steinacli in Prag. Dr. H. Stoeltzner in Halle a. S. Prof. Dr. W. Stoeltzner in Halle a. S. Dr. F. K. Studnicka in Brunn. Dr. N. P. Tischiitkin in Petersburg. Dr. F. Tobler in' Münster (Westf.). Dr. B. de Vecchi in Bologna. Band XXIII. Heft 1. Technik der Spirochäte -üntersucliung. Von S. Prowazek in Burliu. Durch ScHAUDiNNS Entdeckung des Sypliiliserregers , der ur- sprünglicli für eine eclite Spirocliaeta gehalten, später aber unter dem Namen Treponema auf Grund seines morphologischen Baues abgetrennt wurde, rückten in der letzten Zeit die Spirochäten in den Vordergrund des wissenschaftlichen Interesses und so ist es erklär- lich , daß bereits nach einem Jahr eine große Menge von Methoden für die Darstellung dieser zarten Lebewesen von den verschiedenen Autoren aus medizinischen und zoologischen Kreisen, die sich mit der Morphologie und zum Teil mit der Entwicklungsgeschichte dieser Spirocliäten beschäftigt haben, angegeben worden sind. Bevor wir an dieser Stelle an eine übersichtliche Darstellung der wichtigsten und besten Methoden — auf eine Vollständigkeit soll diese Zusammenstellung durchaus nicht den Anspruch erheben — herantreten, soll zunächst eine kurze Charakteristik der Spirochäten selbst gegeben werden. Ehrenberg hat 1835 die. Gattung Spiro- chaeta aufgestellt und sie 1838 in folgender Weise charakterisiert: „Animal e familia Vibrioniorum , divisione spontanea imperfecta in catenam tortuosam s. cochleam filiformem flexibilem elongatura," da- gegen faßte derselbe Forscher alle ähnlich gebauten P^'ormen, die aber im Gegensatz zu den Spirochäten starr sind, unter dem Namen S p i r i 1 1 u m zusammen, eine Unterscheidung, der sicli auch F. Coiin im Gegensatz zu Dujakdin angeschlossen hatte. Die uns besonders interessierenden Spirochäten sind: die große, schöne Sp. plicatilis, die sehr nahe verwandt ist mit der noch Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXIII, 1. 1 2 Prowazek: Technik der Spirochäteuntersuchung. XXllI, 1. nicht beschriebenen Spirochaeta anodontae, die Keysselitz im Kristallstiel der Fliißmnschel entdeckt hatte, sowie mit der zn den Trypanosomen hinüberführenden, ja früher als Trypanosoma be- schriebenen Sp. Balbianii, die Perrin in der letzten Zeit genau untersucht hatte, ferner der Erreger des Rückfallfiebers Sp. Obek- meieri, dann die unter den parasitischen Spirochäten am längsten bekannte Sp. buccalis Steinberg (Sp. denticola Arndt, Sp. dentium Miller, nach Mioula Sp. dentium Cohn), die Spirochäta der Anginaformen Plaut -Vincent, die Spirochäten der Noma und des Hospitalbi'andes, sowie der Lungengangrän, die Spi- rochäten der kariösen Knochen , die zuerst Billroth beobachtet hatte, die Spirochäten der Carcinome, sowie die Sp. refringens, die nach Schaudinn und Hoffmann mit der S p. (Treponema) p a 1 1 i d a vergesellschaftet vorkommt , die Spirochäten des afrikani- schen Zeckenfiebers (Tick fever), die Rinderspirochäten (Sp. Theileri), die Fledermausspirochäten, die Sp, ga Ulnar um der Hühner und die Gänsespirochäte, nicht zu vergessen schließlich der von Schaudinn untersuchten Sp. Ziemanni (Laveran), die uns so viele Aufklärungen über die verwandtschaftlichen Beziehungen dieser Organismen untereinander brachte. Die Spirochäten sind zarte, fadenförmige, biegsame Organismen, die sich um ihre Längsachse vor und zurück in dem betretfenden Medium schrauben und peitschenförmige Bewegungen ausführen; zu- weilen kann man an ihnen auch BeugebcAvegungen des ganzen Kör- pers wahrnehmen. Viele haben mehr oder weniger spitze p]nden, die zuweilen in einen dem Periplast angehörenden, geißelartigen An- hang auslaufen, der vermutlich bei der letzten Durchtrennung der der sich teilenden Organismen gleichsam ausgesponnen wird (vergl. Trypanosomen, Arb. a. d. Gesundheitsamt XXH., pag. 354, Fig. 1). Diese Fortsätze kommen nach der LöFFLERSchen Geißelfärbung sehr schön zum Vorschein, sofern man bei den das Blut bewohnenden Spirochäten durch wiederholtes Waschen und Zentrifugieren das störende Serum entfernt hat (Borrel, Compt. rend. d. Soc. Biologie LX, 1902). Diese Anhänge hat auch Keysselitz bei der Sp. ano- dontae nach der Färbung mit Heidenhains Eisenhämatoxylin und Perrin bei der S p. b a 1 b i a n i aus dem Kristallstiel der Auster beobachtet. Zettnow färbte die Geißelanhänge der Spirochäten des afrikanischen Recurrens mit einfacher Methylenblaufärbung und konnte so ihren Unterschied zu den Geißeln der Bakterien feststellen (Berl. klinische Wochenschrift Nr. 7, 1906). Die Treponema besitzt XXIII, 1. Prowazek: Teclinik der Spirochäteuntersuchung. 3 dagegen an jedem Pol einen langen, welligen „Geißel"anliang (Peri- plastfaden) , der eben als Periplastfortsatz beweglich ist und bei der entspreche n d e n Eintrocknung des umgebenden Serums bei einiger Übung im mikroskopischen Sehen nicht schwer nachweisbar ist. Karlinski will auch bei der Re curr en s sp ir chäta (in 100 Präparaten 5mal) an jedem Pol Geißelanhänge gesehen haben, und auf ähnliche morphologische Gebilde schließt Zopf aus den Wasserstrudeln, die bei der Bewegung der Sp. plicatilis und Obermeieri entstehen. Dagegen gibt Baron für Sp. buccalis eine vollkommen peri- triche Begeißelung an, die also der ähnlich wäre, die Borrel in der oben zitierten Arbeit für die Sp. ga Ulnar um beschrieben hat. Er wusch in der früher bereits angedeuteten Weise die Spirochäten von ihrem Serum rein und färbte dann mit Löfflers Geißelmethode. Ähnliche Geißeln hat Zettnow (Deutsche med. Wochenschr. No. 10, XXXII. Jahrg.) bei der Recurrensspirochaeta mit Antimonbeize und Äthylaminnachversilberung sichtbar gemacht. Mir scheinen sie nur Auffaserungen der Periplastmyophane zu sein ; eine peritriche Be- geißelung ist mit der Art der Bewegung der flexiblen Formen un- vereinbar. Eine undulierende Membran, deren Vorhandensein für Protozoen charakteristisch ist, kann bei der Sp. Balbianii und Sp. anodontae leicht wahrgenommen werden, für die Sp. pli- catilis, ZiEMAXNi, Obermeieri, buccaüs und anserina wurde sie von Schaudinn angegeben , bei dem T r e p n e m a pal- lidum ist der ersten Mitteilung Schaudinn s zufolge „die Andeutung einer undulierenden Membran zuweilen wahrzunehmen". Gut sichtbar ist sie als eine selbständig bewegliche, verdickte Randleiste bei der Hühnerspirochäta, wo man sie in günstigen Fällen unter Umständen am Rand des Austrittspräparates, das noch vor dem Eintrocknen mit einer Mischung von lOprozentigem Acid. liquefact. carbol. und 40pro- zentigem Alkohol oder Drittelalkohol nach Ranvier (60 Prozent Alko- hol, 1 Teil auf 2 Teile Wasser) behandelt, mit der Platinöse aus- gestrichen und mit Giemsas Eosinazur nachgefärbt wurde, an den stark zusammengezogenen Individuen als einen welligen Faden fast in ihrer gesamten Ausdehnung zu verfolgen in der Lage ist. Leichte Quellung der Spirochäteleiber mit destilliertem Wasser und nachträg- liche LÖFFLER-Färl»ung machen sie auch gut sichtbar. Für ihre Dar- stellung empfiehlt sich bei der S p. buccalis die Löffler sehe Geißelfärbung: die im absoluten Alkohol fixierten Ausstriche 1* 4 Prowazek: Technik der Spirochäteuntersucliung. XXIII, 1. werden mit einem Tropfen von Löfflers Beize (zu 10 cc einer Lösung von 20 g Tannin in 80 cc Wasser setzt man 5 cc einer ge- sättigten Lösung von Eisenoxydulammoniumsulfat und 1 cc einer wässerigen oder alkoholischen Lösung von Fuchsin, Methylviolett oder Wollschwarz mit einer Spur von Natronlauge) beschickt und über der Flamme so lange erwärmt, bis Dämpfe aufsteigen (mehrmals wiederholen), dann im destillierten Wasser gewaschen und mit Ani- linwasserfuchsin gefärbt. Dieses bereitet man sich in geringer Menge jedesmal frisch aus einer alkoholischen (90 Prozent) Fuchsinstamm- lösung, der man bis zu einer ganz leichten Trübung minimale Spuren von Calciumcarbonat (1 Prozent) zugesetzt hat; wie im ersten Falle werden die Deckglasausstriche über der Flamme so lange erwärn)t, bis sich das Anilinwasserfuchsin plötzlich aufhellt, diese Prozedur wiederholt man nochmals, wäscht im destillierten Wasser ab, trocknet und schließt das Präparat in Balsam ein. Löwenthal beobachtete in der Mmidspirochäta Chromatin- flecke; in der Hühnerspirochäta kann man nach vorhergegangener Behandlung des frischen Ausstriches mit Acid. carbol. liquefact. ganze Reihen von etwas länglichen Chromatinköruern mit der Eosin- azurfärbnng nach Giemsa zur Darstellung bringen. Über die Kernverhältnisse des Treponema pallidum kann man derzeit trotz der Untersuchungen von Herxheimek und Loser (Münch. med. Wochenschrift 1905, Nr, 40, Deutsche med. Wochen- schrift 1905, Nr. 26), vor allem aber der Ermittlungen von Siedlicki und Krzysztaloavicz (Bullet. Acad. Sc. de Cracovie 1905) kein ab- schließendes Urteil fällen. Das Chromatin der großen Spirochäten ist mit den üblichen Methoden, vor allem mit Giemsa s Eosin azur und Th ionin darstellbar. Für das Studium der zarteren Spirochäten während ihres Lebens empfiehlt sich die Anwendung der Zeiss sehen Immersions- systeme, zum Aufsuchen des Treponema pallidum Kompen- sationsokular 8. Wesentlich erleichtert wird das Suchen durch den verschiebbaren Kreuz tisch. Auch das Ultr a mikroskop leistet dabei gute Dienste, so konnte Löwenthal in einigen Fällen in den dickeren Formen je einen Kern nachweisen. Die Anwendung des Polarisationsapparates lieferte keine nennenswerten Resultate. Von Vitalfärbungen wurden bis jetzt Tinktionen mit N e u t r a 1 r 1 , M e t h y 1 g r ü n , Methylenblau und Brillant- kresylblau, das von Ehrlich und Levaditi in die mikroskopische Technik eingeführt worden ist, versucht. Mit dem letzteren färben XXIII, 1. Prowazek: Technik der Spirochäteuntersuchimg. 5 sich bei der Hülinerspirochäta die chromatischen Einlagerungen violettblau, während das Protoplasma einen leichten, bläulichen Farbenschimmer annimmt. In einem ähnlichen Sinne konnten mit diesem Farbstoff, wenn auch nicht so deutliche Vitalfärbungen an des Treponema vorgenommen werden. Vital färbt sich ferner mit Methylenblau die Iliihner- sprochäta und die große Sp. Balbianii (Perrin). Mit Neutralrot kann man die verschiedenen V e r d a u u n g s s t a d i e n der von Leuko- cyten aufgenommenen Spirochäten zur Darstellung bringen und ist in der Lage, die Mundspirochäta in den zahlreichen Nahrungsvakuolen der Mundamöbe (Entamoeba buccalis) nachzuweisen und ihre Verdauung (alkalisch) zu verfolgen. Konnte man mit T r y p s i n und noch besser mit Pepsin den Periplast der Trypanosomen insofern schön isolieren , als das von ihm eingeschlossene Protoplasma verdaut wurde , so lieferten die in diesem Sinne bei den Spirochäten augestellten Versuche keine Re- sultate. Dasselbe gilt von List's B e r 1 i n e r b 1 a u m e t h d e , sowie von der Osmium fett- und Gly kogenr eak tion. Vom Interesse ist ferner das Verhalten der Spirochäten Gly- zerin gegenüber insofern, als Lyssa und Vaccinevirus gegen Glyzerinlösungen ziemlich widerstandsfähig ist. In einer 40prozen- tigen Glyzerinlösung ziehen sich die meisten Hühnerspirochäten zusammen, einige sterben ab, während andere vielfach „zerknit- terte" Ösen- und Schlingenformen annehmen , ohne gleich zugrunde zu gehen; immerhin kann man mit einem derartigen 12 Stunden alten Material keine positiven Impfungen mehr vornehmen. Nach SchÄudinn wird ein Teil des Trep. pallidum nach 5 bis 10 Mi- nuten unbeweglich , andere büßen wiederum ihre "Windungen ein, strecken sich gerade aus oder ziehen sich zu kleineren ovalen Ge- bilden zusammen. Schließlich hat Metscpinikoff durch Übertragungs- versuche die Widerstandsfähigkeit des Syphilisvirus gegen Glyzerin nachgewiesen. Durch wasserentziehende Mittel wie Kochsalzlösungen von 5 bis 10 Prozent kann man an den Protoplasmaleibern der Spirochäten im Gegensatz zu den Bakterien keine plasmolytischen Erscheinungen erzeugen, die nach A. Fischer (Berichte d. k. sächs. Gesellsch. d. Wiss. 2. März 1891, p. .52 — 74; Ptef. Zentralbl. f. Bakteriol. Bd. X, p. 158) bei sehr vielen Bakterien, vor allem aber bei Vibrionen und Spirillen meistens schon unter dem Einfluß von ein- bis ^/j^prozentigen Kochsalzlösungen sicher aber bei Anwendung von öprozentigen Lösungen eintreten. In diesem Sinne besteht also 6 Prowazek: Technik der Spirochäteuntersucliung-. XXllI, 1. zwischen beiden OrganismengTuppen ein beträchtlicher Unterschied, den NovY gar nicht berücksichtigt hatte (Fischer, Vorlesung, üb. Bakterien 1903, p. 25), der aber Weigert bereits bekannt war. Bei den Spirochäten tritt ferner keine deutliche Pl'asmoptyse ein , es sei denn , daß man an den unter dem Einfluß von Immun- serum (bis zu 0"001 cm) immobilisierten Hühnerspirochiiten gewisse Unterbrechungen und Lücken in dem piasmatisclien Aufbau ihres Zellleibes in diesem Sinne deuten will. Bei Kalilaugezusatz werden die Spirochäten abgetötet, zum Teil sogar gelöst, doch bleiben von ihnen blasse Schatten übrig, während die Bakterien sich durch eine nicht unbeträchtliche Widerstandskraft den angeführten Chemi- kalien gegenüber auszeichnen, eine Erscheinung, die von Baumgarten gerade in seiner sogenannten Kalimethode mit Erfolg zum Nach- weis der Bakterien ihre Anwendung gefunden hatte. Die bis jetzt in der Literatur bekannt gewordenen Kultur- versuche, die an den verscliiedenen Spirochäten angestellt worden sind, führten noch zu keinem eindeutigen positiven Resultat. Es ist bekannt, daß man die Mu u d sp ir oc h ät eu, sowie die Hühner- spirochäten (im Eisschrank mehrere Tage) längere Zeit halten kann, dasselbe gilt von der Aus ternspiro diät a (Perrin) und A no d n taspir och ät a (Keysselitz) , doch fielen alle in diesem Sinne ausgeführten eigentlichen Kulturversuche negativ aus (Kraus, Levaditi, Perrin, Keysselitz). Das Treponema hält sich in den ausgeschnittenen Papeln 6 bis 8 Stunden lang, doch werden ihre Bewegungen langsamer und unregelmäßiger. Schaudinn konnte sie in der Schulze sehen Kammer über die Nacht halten. Für die verschiedenen Färbungen werden entAvedcr direkt Aus- striche des spirochätehaltigen Materials auf Deckgläschen (Blutdeck- gläsclien) angefertigt, diese lufttrocken gemacht und mit absolutem Alkohol 10 bis 15 Minuten fixiert oder man färbt ohne Fixation (bei Treponema und Sp. gallinarum) gleich nach Giemsa , nachdem man vorher die Färbemischung etwas stärker alkalisiert hat. Für die größeren rigideren Formen empfiehlt sich eine nasse Aus- strichfixierung im Sublimatalkohol. Man nimmt -/g konzentrierte Sublimatlösung -|- ^j^ OOprozentigen Alkohol, mischt beides in einem Kölbchen, erhitzt das Gemisch und läßt dann mit der Ausstrichseitc das feuchte Präparat auf die erwärmte Fixierungsflüssigkeit fallen, wäscht nach einiger Zeit mit Jodalkohol aus und färbt entweder mit Heidenhaixs Eisenhäniatoxylin, mit (Jrexachers Ilämatoxylin, Thionin oder Pikrokarmin. Die derart gefärbten Präparate werden durch XXllI, 1. Prowazek: Technik der Spirochäteuntersuchung. 7 die Alkoholreihe durchgeführt, in Xylol gebracht und in Kanada- balsam eingeschlossen ; die nach Giemsa gefärbten Ausstriche schließt man besser nach dem Vorschlage von Kocii und Schaudinn in reines Zedei'nöl ein. Die Form der Spirochäten wird gut nach der folgenden Methode, die mir Prof. Weidenreich (Straßburg) mitgeteilt hatte , zur Dar- stellung gebracht: 5 cc einprozentiger Osmiumsäure Averden in eine flache Glasdose gegossen und 15 Tropfen Eisessig hinzugefügt. Auf die Dose legt man die gut gereinigten Objektträger und setzt sie derart für einige Minuten den Osmiumdämpfen aus, dann fertigt man über der „Dampfseite" des Objektträgers einen Ausstrich mit dem fraglichen Spirochätenmaterial an , das , sofern es nicht dick aus- gestrichen wurde, bald eintrocknet. Weidenreich trocknet das Prä- parat noch über der Flamme und übergießt es nach dem Erkalten für etwa 1 Minute mit einer dünnen hellroten Kaliumpermanganatlösung. Nach dem Auswaschen färbt mnn entweder nach Giemsa oder mit Triacid. Ältere Angaben über die Technik der Spirochätenfärbung linden sich im Handbuch der pathogenen Mikroorganismen von Kolle und Wassermann 1905 im Artikel „Rückfallfieber" von Wladimiroff (p. 85 f.). Die Syphilisspirochäten färbten Schaudinn und Hoffmann (Vorl. Bericht üb. d. Vorkommen von Sp. in syphilit. Krankheitsprodukt, etc. Arb. a. d. K. Gesundheitsamte Bd. XX, 1904, p. 527) nach einer Modifikation der Giemsa sehen Azur-Eosin-Färbung: „Die gut fixierten Deckgläser kamen für IG bis 24 Stunden in eine stets frisch her- "■& gestellte Mischung von : 1) 12 Teilen Giemsa s Eosin-Lösung (2*5 cc einprozentige Eosiu- lösung auf 500 cc Wasser) ; 2) 3 Teile Azur I (Lösung 1 : 1000 Wasser); 3) 3 Teile Azur H (Lösung 0'8 : 1000 Wasser). Nach kurzem Abspülen in Wasser werden die Deckgläser getrocknet und in Zedernöl eingeschlossen." Giemsa (Deutsche med. Wochenschr. 1905, No. 2G, p. 1026) empfahl später die folgende fertige (käufliche) Lösung: Azur II -Eosin 3-0 „ Destilliertes Wasser 100 ,, Hernach werden sie abermals gewaschen, in der Alkoholreihe entwässert, Xylol, Xylolparaffin, Paraffin. Diese Methode wurde abgeändert und ist besonders in der fol- genden von Levaditi und Maxquelian in Coraptes rendus societe de la Biologie vol. LX, No. 3, 26. Jan. 1906 publizierten Form zu empfehlen : 1) Des fragments d'organes d'un a deux millimetres d'epaisseur sont fixes pendant vingt-quatre a qua r ante huit heures dans une Solution de formaline a 10 p. 100. 2) Lavage a l'alcool (96 °j pendant douze a' seize heures; 3) Lavage a l'eau distillee jusqu'a ce que les pieces tombent au fond du recipient; 4) Impregnation par le bain suivant : Solution du uitrate d'argent a 1 p. 100. Ajouter au moment de l'emploi : 10 p. 100 de pyridine (Cogit ou Billault). Les flacons bouches a l'emeri, contenant une assez grande quantite de ce melange, sont maintenus pendant deux a trois heures :i la 12 Baläzsy: Zur Glimmerteclmik. XXIII, 1. temperature de la chambre, et quatre a six lieures a iine temperature d'environ 50 degres. 5) Lavage tres rapide dans iine Solution de pyridine alOp. 100. 6) Rediiction par le baiu suivant: Solution d'acide pyrogallique a 4 p. 100. Ajouter au moment de l'emploi: 10 p. 100 d'acetone puri- fiee (56/58) et 15 p. 100 (du volume total) de pyridine. La reduction s'opere deja au bout de quelques lieures. 7) Alcool, xylol, paraffine et coupes. Les coupes sont colorees au bleu de Unna ou au bleu de toluidine et differeuciees a l'aide du melange etherglycerine de Unna." [Eingegangen am 3. März 1906.] [Aus dem I. Anatomischen Institut der Universität Budapest. Vorstand: Prof. Dr. M. v. Lenhossek.] Zur Gliininertechnik. Von Stud. med. D. Bahizsy, Praktikant am Institut. M. Heideniiain ^ hat unlängst eine ausführliche Beschreibung jener ,, Glimmermethode" gegeben, die dazu berufen ist, im histo- logischen Kurs die Verteilung der mikroskopischen Schnitte en masse zu erleichtern. Ich möchte nun diese Beschreibung durch ein Detail ergänzen, durch welches das Verfahren noch handlicher, noch voll- kommener gestaltet wird. Heideniiain führt die mit den Schnitten beschickte Glimmerplatte durch Farbstotf, Wasser, Alkohol und Xylol durch und beendigt da- mit den Vorgang, d. h. die einzelnen Schnitte werden aus dem Xylol ^) Heideniiain, M., Über Massenfärbung mikroskopischer Schnitte auf Glimmerplatten (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XXII, p. 330, 1905). XXIII, 1. Baläzsy: Zur Gliiumertechnik. 13 in feuclitem Zustande verteilt. Hier setzt nun unsere Modifikation ein. Wir gehen noch einen Schritt weiter, indem wir die mit Xylol aufgelieliten Platten mit einer selir dünnen Lösung von Damarlack in Xylol überziehen und die Platten eintrocknen lassen, wodurch eine Verteilung der Schnitte im trockenen Zustande ermöglicht wird. Die Damarlacklösung darf nicht allzu dünn sein , da sonst die Schnitte, besonders wenn sie etwas dicker sind , von der eintrocknenden Lösung nicht ganz bedeckt werden und so durch Schrumpfung und Verzerrung Schaden leiden können. Zum Trocknen stellt man die Platten an einen staubfreien Ort ; in 24 bis 48 Stunden sind sie vollkommen eingetrocknet und lassen sich, ebenso wie die noch nicht mit Xylol behandelten trockenen Paraffinglimmerplatten , zwischen Fließpapier aufheben und im histologischen Kurs trocken verteilen, in der Weise , daß man die Platte mit einer (möglichst großen) Papierschere zuerst in längere Streifen schneidet und dann von diesen die einzelnen Schnitte mit einer kleineren Scheere abtrennt. Die Studierenden geben vorher einen Tropfen Kanadabalsam oder Damarlack auf ihren Objektträger ; auf diesen Tropfen kommt das Glimmerplättchen, mit dem Präparat nach oben, und wird dann mit dem Deckgläschen bedeckt. Unser Verfahren hat — neben der größeren Handlichkeit des Trockenverteilens — besonders zwei Vorzüge: 1. In größeren In- stituten, wie z. B. in den beiden hiesigen anatomisch - histologischen Anstalten, müssen die Teilnehmer am Kurs wegen ihrer großen Zahl in Gruppen verteilt werden, die an verschiedenen Tagen der Woche arbeiten; für diese werden die Schnitte wohl überall, wie hier, am Anfang der Woche gemeinsam angefertigt. Bei der bisherigen — bis zu Anfang dieses Jahres auch bei uns geübten — Methode müssen die fertigbehandelten Glimmerplatten von einem Tag auf den anderen in Xylol aufgehoben werden. Nun haben wir die Beobachtung gemacht, daß die Färbung der Präparate durch das Liegen im Xylol oft Schaden leidet, was natürlich bei unserer Trockenmethode in Wegfall kommt. 2. Bei der früher geübten feuchten Methode kam es häufig vor, daß die Hörer, nachdem sie schon ihren Schnitt be- kommen hatten, sich mit der Bedeckung des Schnittes mit dem Kanadabalsamtropfen nicht allzusehr beeilten und so den Schnitt durch Verdunsten der Xylolschicht eintrocknen und verderben ließen. Bei der beschriebenen Modifikation ist dies natürlich ausgeschlossen. Die Methode des Überziehens der Glimmerplatte mit einer Damar- lackschicht kann natürlich nicht nur bei den Paraffiuschnitteu, sondern 14 S 1 e 1 1 z n e r : Einfluß der Fixierung auf d. Volumen d. Organe. XXIII, 1. auch bei den nach der Methode von Argutinsky ^ und Tellyes- NiczKY" auf Glimmer aufgeklebten Celloidiusclmitteu Anwendung finden. [Eingegangen am 5. April 190G.] [Aus der Universitäts-Poliklinili für Kinderkrankheiten in Halle a. S. Direktor: Prof. Dr. Stoeltzner.] Der Einfluß der Fixierung auf das Yolumen der Organe. Von Dr. Helene Stoeltzuer in Halle a. S. Das Volumen nicht nur pflanzlicher sondern auch tierischer Zellen ist abhängig- von der Konzentration der die Zelle umgebenden Lösung, wie Hamburger'^ zuerst durch Untersuchungen an Blut- körperchen nachgewiesen hat. Nach Hamburger besteht das Blutkörperchen aus einem proto- plasmatischen Netz, in dessen Maschen sich eine rotgefärbte Masse befindet. Diese ist es, die das wasseranziehende Vermögen des Blut- körperchens darstellt. Das protoplasmatische Netz ist hieran nicht beteiligt. Hi^MBURGER fand, daß Salzlösungen, welche einen eben begin- nenden Farbstoffaustritt aus derselben Blutart veranlassen, sich unter- einander als isotonisch erweisen, d. h. denselben osmotisclien Druck haben. Der Blutfarbstoff tritt erst dann aus, wenn durch die relative ^) Argutinsky, F., Eine einfaclie und zuverlässige Methode, Celloidin- serien mit Wasser und Eiweiß aufzukleben (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LV, p. 415, 1900). -) Tellyesniczky, K. v. , Auf kleben der Cellüi'dinschnitte (Verhandl. d. anat. Gesellsch. .Tena. p. 182, lilOl). ^j Hamburger, Osmotischer Druck und lonenlebre in den Medizinischen Wissenschaften Bd. I, p. 170. Wiesbaden 1902. XXIII, 1. Stoeltzner: Einfluß der Fixierung auf d. Volumen d. Organe. 15 Drucksteigerung; der intracellularen Flüssigkeit der Widerstand der äußeren Protoplasraabegreuzung überwunden wird. JNIit Piücksicht auf diese Tatsachen w^eist Höber^ darauf hin, daß es zweckmäßig wäre , osmotisch indifferente Konservierungs- flüssigkeiten für die zu konservierenden Organe und Organismen her- zustellen. Zur weiteren Begründung seiner Vermutung führt er Ver- suche BoTAzzis an. Dieser fand, daß Selachiergeliirne nach Auf- enthaltin MüLLERScher Flüssigkeit stark gequollen und an verschiedenen Punkten geplatzt waren. Die Ursache hierfür soll die starke Hypotonie der Müller sehen Flüssigkeit gegenüber den Selachier- geweben sein. Auch Dekhuyzen" hatte bemerkt, daß die delomorphen Zellen der Säugetiere im Flemming sehen Gemisch bedeutende Schrumpfungen erleiden, und führte das darauf zurück, daß diese Flüssigkeit einen dreifach größeren osmotischen Druck als das Blut der Warmblüter besitzt. Hamburger^ hat den Einfluß auf das Volumen der roten Blut- körperchen bei Fixierung durch Formalin untersucht. Nachdem das Blut mit der Fixierungsflüssigkeit versetzt war, wurde die Mischung so lange zentrifugiert, bis das A'olumen des Sedimentes eine Viertel- stunde lang konstant blieb. Auf diese Weise kam Hamburger zu folgenden Picsultaten : Das Volumen der Blutkörperchen hat durch Behandlung mit Formalingemisch* bedeutend zugenommen, obgleich die Lösung stark hypertonisch war. Hamburger versuchte die Ur- sachen der quellenden Eigenschaften des Formalins festzustellen, in- dem er einmal die Salzmengen in der Formalinlösung auf die Hälfte reduzierte, und dann die Salze (MgSOj,, Na^SO^) durch eine 0"9pro- zentige Na Cl- Lösung ersetzte. Doch war auch hier die Quellung der roten Blutkörperchen sehr bedeutend. Ebensowenig bestätigte sich seine Vermutung, daß etwa die Ameisensäure, die als Oxydations- produkt des Formols gewöhnlich im käuflichen Präparat vorkommt, an der Quellung schuld sei. Zu einem Abschluß der Versuche ist ^) Höber, Physikalische Chemie der Zelle und der Gewebe, p. 56. Leipzig 1902. ") Dekhuyzen, Comptes rend. 17 acut, 31 aout 1903; zitiert nach Hamburger Bd. III, p. 410. Wiesbaden 1904. ^) Hamburger, Osmotischer Druck und lonenlehre in den Medi- zinischen Wissenschaften ßd. III, p. 404. Wiesbaden 1904. ' ') NaCl 5 g, MgSO^ 10 g, Na,,SOi 10 g, H,0 500 g, Formahn (des Handels) 50 g. 16 Stoeltzner: Einfluß der Fixierung auf d. Volumen d. Organe. XXIII, 1. Hamburger noch nicht gekommen. Doch gibt er seine Ansicht über die Formaliniixienmg in folgenden Worten kund: „Indessen ist, wie man auch über die Erklärung denken möge, bereits jetzt das Eine aus den oben erwähnten Versuchen zu folgern, daß nämlich gegen- über der Annahme , die Formalinfixierung habe auf die Größe der Gewebeelemente keinen Einfluß, Vorsicht geboten ist. — Auch die feinere Struktur wird zweifellos von derselben beeinflußt, da nicht anzunehmen ist, daß alle Gewebeelemente eine gleichgradige Vohimen- vermehrung erfahren werde." Nach diesen Darlegungen erscheint eine Prüfung des Einflusses der üblichen Fixierungsflüssigkeiten auf das Volumen der zu fixieren- den Objekte nicht überflüssig. Von diesem Gesichtspunkte ausgehend habe ich eine größere Anzahl von Fixierungsflüssigkeiten untersucht. Es wurde dabei so vorgegangen, daß sowohl der Einfluß der Fixierungsflüssigkeiten auf das Volumen von ganzen Organen resp. Organteilen, als auch der osmotische Druck der Lösungen festgestellt wurde. Bei der Her- stellung der Fixierungsfliissigkeiten habe ich mich genau an die Vor- schriften von ScHMORL-^ gehalten. Soweit die Möglichkeit vorlag, wurden stets ein bis mehrere Kontrollversuche gemacht. Die Tiere (Ratten, Meerschweinchen, Mäuse) Avurden durch Chloroform getötet und die Organe sofort verwendet. Der osmotische Druck wurde an der Gefrierpunktserniedrigung gemessen, und diese nach der üblichen Methode mit dem Beckmann- schen Apparat bestimmt.^ Das Volumen der Organe wurde nach dem bekannten Archi- MEDES sehen Prinzip festgestellt. Die zu fixierenden Stücke wurden zuerst frei in der Luft hängend und dann in physiologischer NaCl- Lösung (0'9prozentig), nach der Fixierung gleichfalls frei in der Luft und darauf in der Fixierungsflüssigkeit gewogen. Nachdem das Gewicht einer bestimmten Menge Na Gl -Lösung und einer bestimmten Menge von Fixierungsflüssigkeit festgestellt war, geschah die Berech- nung nach folgendem Beispiel: Niere einer Ratte, Fixierung in konzentrierter, wässeriger Sublimat- lösung : ^) ScHMORL, Die pathologisch-histologischen Untersuchungsmethoden. 2. Aufl. Leipzig 1901. -) Der Gefrierpunkt von frisch gekochtem, destilliertem Wasser wurde an jedem Tage, an welchem ich Versuche anstellte, vor Beginn und nach Beendigung derselben von neuem bestimmt. XXIII, 1. Stoeltznor: Einfluß der Fixierung :uit' d. Vülumen d. Organe. 17 Gewicht von 100 cc Na Cl- Lösung 100-73 g Gewicht von 100 cc konzentrierter Hg Ol, -Lösung. . =105-11 Gewicht der frischen Niere in Luft = lOG Gewiclit der frischen Niere in 0-9prozent. Na Cl- Lösung := OOG „ 1-00 g. Demnach ist l-Oü g der Gewichtsverlust der frischen Niere in plijsiologischer Na Cl- Lösung, gleich dein Gewiclit der durch die Niere verdrängten NaCl- Lösung. Bezeichnen wir das Volumen der Niere mit x, so erhalten wir also folgende Gleichung: 1-00 : 10073 = ^: 100; x 100 100-78 loglOO =2-00000 log 100-73 = 20031G Nlg 0-99684 — 1 = 0-99 = x = Volumen der Niere vor * der Fixierung. Analog ergibt sich das Volumen nach der Fixierung : Gewicht der fixierten Niere in Luft : 1-27 g Gewicht der fixierten Niere in konz. HgCL-Lösung = 012 1-15 g. Demnach ist 1-15 g der Gewichtsverlust der fixierten Niere in konzentrierter Hg Gl., -Lösung, gleich dem Gewicht der durch die Niere verdrängten HgCL- Lösung. log 115 = 2-06070 log 105-11 = 2-02164 Nlg 0-03906 = 1-09 = Volumen der Niere nach der Fixierung. .Es ergibt sich hiermit eine Quellung der Niere durch die Fixierung um 0-10, d. h. um lO'l Prozent. Versuch 1. Fixierung in auf das lOfachc mit destilliertem Wasser verdünntem For malin. Leber (Ratte). 10-5 Prozent Quellung 12-9 11-1 ,, 13-0 Niere (Ratte). 1 Testikel (Ratte). 8-0 Prozent Quellung ; 1-05 Prozent Quellung 15-0 „ „ 1-01 Niere (Maus). 22*5 Prozent Quellung 24-0 Milz (Ratte). 12-4 Prozent Quellung , Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXIII, 1. Gehirn (Ratte). 15-0 Prozent Quellung 18 Stoeltzner: Einfluß der Fixierung auf d. Vulunien d. Organe. XXIII, 1. Versuch 2. Fixierung in konzentrierter wässeriger P i k r i n - s ä u r e 1 ü s u n g. Niere (Ratte). Leber (Ratte). 23-4 Proz. Sclirumpfung 21 'o „ „ Leber (Maus). 11-4 Proz. Sclirumpfung 131 „ 15-3 „ 13-0 Prozent Quellung 8-45 „ Niere (Maus). 15-3 Prozent Quellung 11-4 Gehirn (Ratte). 758 Prozent Quellung. Milz (Ratte). 15'7 Prozent Quellung Hier ist die volnraverändernde Wirkung noch bedeutender als beim Formalin. Es Averden nicht alle Organe in gleicher Weise beeinflußt. Während die Leber eine starke Schrumpfung erleidet, zeigen Niere, Milz und Gehirn eine starke Quellung. Versuch 3. Fixierung in O'Oöproz entiger wässeriger Leber (Ratte). 52-8 Prozent Quellung 72-9 Chromsäurelösung. Niere (Ratte). 4G*9 Prozent Quellung 40-5 Testikel (Ratte). 3i)-0 Prozent Quellung 25-6 Gehirn (Ratte). 95G Prozent Quellung Milz (Ratte). 580 Prozent Quellung Versuch 4. Fixierung in Zenkers eher Flüssigkeit. Leber (Ratte). 17-8 Proz. Schrumpfung 17-9 „ Niere (Ratte). 13-3 Proz. Schrumpfung 11-1 „ Milz (Ratte). 7"97 Proz. Schrumpfung. Testikel (Ratte). 5-5 Proz. Schrumpfung 8-59 „ Versuch 5. Fixierung in MtJLLERscher Flüssigkeit. Leber (Ratte). lO'O Proz. Schrumpfung Niere (Ratte). G-7 Proz. Schrumpfung 7-09 „ Gehirn (Ratte). 9-41 Prozent Quellung. Testikel (Ratte). 128 Proz. Schrumpfung 130 „ XXI1I,'1. Stoeltzncr: Einfluß der Fixierung auf d. Volumen (1. Organe 19 Ancli die Cliromsänre , die ZENKERScbe und die MüllerscIic Flüssigkeit bewirken eine mehr oder weniger starke Volumändenmg der Organe. Versuch G. Fixierung in 70p r ozentigem Alkohol. Niere (Ratte). (i'2 Proz. Schrumpfung 7 '8 ,, ,, Testikel (Ratte). 7'15 Proz. Schrumpfung 13-4 „ Versuch 7. Fixierung in Alkohol von steigender Konzen- tration (70 — 96 Prozent); Meerschweinchen. Leber : 120 Proz. Schrumpfung Niere : 18-7 Proz. Schrumpfung 15-4 „ Testikel: 22-7 Proz. Schrumpfung 11-9 „ Milz: 161 Proz. Schrumpfung. Versuch 8. Fixierung in absolutem Alkohol; Meerschweinchen. Niere: 46"4 Proz. Schrumpfung 35 "4 Leber: 8-40 Proz. Schrumpfung Versuch 9. Fixierung in Sublimat-Eisessig; Meerschweinchen. Leber : 698 Proz. Schrumpfung 4-27 0-88 • ., Quellung 0-1 „ Leber (Maus): 14-8 Proz. Quellung 32-1 Niere : 11-2 Prozent Quellung 18-4 Milz: 13-2 Prozent Quellung Gehirn: 20-3 Prozent Quellung. Versuch 10. Fixierung in wässeriger konzentrierter Leber: 1*68 Prozent Quellung 1-32 S u b 1 i m a 1 1 ö s u n g ; Ratte Niere : 101 Prozent Quellung 7-77 Milz: 8-99 Prozent Quellung. Testikel: 7-07 Prozent Quellung 7-98 9* 20 S t o c 1 1 z n c r : Einfluß der Fixierung auf d. Volumen d. Organe. XXllI, 1. Die Versuche 7 , 8 , 9 und 10 zeigen die schrumpfende Wirkung des Alkohols wie auch die quellende Eigenscliaft der Suhlimatlösungen. Es lag daher die Vermutung nahe, man könnte vielleicht durch Verbindung von Sublimat und Alkohol eine Lösung bekommen , die das Volumen der Objekte wenig oder gar nicht verändert. Versuch 11. Fixierung in einer gesättigten Lösung von Hg CL in 70pr zentigem Alkohol. Leber (Meerschweinchen) : 7-82 Prozent Quellung 7-11 Niere (Meerschweinchen) : 17-2 Prozent Quellung 10-[l Versuch 12. Fixierung in einer gesättigten Lösung von HgCl.2 in 17\.,pro zentigem Alkohol; Meerschweinchen. Leber: 7"96 Prozent Quellung 4-77 Niere : 12-9 Prozent Queliung 14-9 Versuch 13. Fixierung in einer gesättigten Lösung von HgCl,2 in 20pr ozentigem Alkohol; Meerschweinchen. Leber : 7'59 Prozent Schrumptung 4-22 Niere : 4-91 Prozent Quellung Versuch 14. Fixierung in einer gesättigten Lösung von HgClo in 25p r ozentigem Alkoh ol; Meerschweinchen. Leber : 9'4 Proz. Schrumpfung 121 „ Niere : 7'0 Proz. Schrumpfung 7-9 Milz : 4-0 Proz. Schrumpfung 2-87 Quellung Wie die Versuche 11, 12, 13 und 14 zeigen, lassen auch diese Flüssigkeiten das Volumen der Organe nicht ohne erhebliche Ver- änderung, wenngleich die Resultate z. T. besser sind als in den vor- hergehenden Versuchen. XXIII, 1. S t () ol tzncr: EinHiiß der Fixicnuif;- aufd. Volumen d. Organe. 21 Versuch 15. Fixierung- mit in der Wärme gesättigter Lösung von HgCi., in OGprozentiger NaCI-Lösung; Meerschweinchen. Leber : lO'O Proz. Schrumpfung 2-08 „ Niere : 5-6 Prozent (^uellung 3-25 „ 4-68 Milz : 1P7 Prozent Quellung Versuch IG. Fixierung in einer gesättigten Lösung von Hg Cl., in !> !i y s i o 1 g i s c h e r Na jCl - L Ö s u n g (Ol) Prozent)-, M e e r - seh wein eil en. Leber: 3-35 Prozent Quellung 0-8 Niere : 8-53 Prozent Quellung 8 "48 Testikel : 5'79 Prozent Quellung i'vo „ „ Gehirn: 1(5 Prozent Quellung. Ahnliclie Voliinienänderiingen, wie bei den vorliergehenden Ver- suchen, sind also aucli bei den beiden letzten zu beobachten. Daß eine gesättigte Lösung von IlgCl., in O'Gprozentiger NaCl- Lösung quellend wirkt, wäre leicht einzusehen, wenn man sicli vorstellen wollte , daß das Sublimat schnell in die Gewebe ein- dringt, und daß somit bald in der Zelle , noch bevor eine Fixierung möglich ist, ein höherer Druck herrschen muß als in der Außen- flüssigkeit. Um so schwerer ist aber die quellende Wirkung einer mit HgCi.2^ gesättigten 0*9prozentigen NaCl-Lösung zu verstehen. Viel- leicht ist folgende Erklärung zulässig: Nach den Lehren der physikalischen Chemie spaltet sich in verdünnter wässriger Lösung das Sublimat in die Ionen llg" und 2 er, und das Kochsalz in die Ionen Na* und Cl'. Bringt man IlgCl., in eine NaCl-Lösung, so bildet sich wahrscheinlich ein komplexes Salz ' nach folgender Gleichung : ,Cl + 2N:iCl = Na Hi :HgCL Cl Na Aus 7 Ionen würden demnach 3 werden. 1) HamhijrCxER, 15(1. IlT, p. 2(;-2. 22 ytoeltzner: Einfluß der Fixierung auf d. Voluraen d. Organe. XXIII, 1. Die bisherigen Versuclie haben deutlich gezeigt, daß die in der mikroskopischen Technik zur Fixierung verwendeten Flüssigkeiten das Volumen der Organe in nicht zu vernachlässigender Weise ver- größern oder vermindern, und daß sie nicht alle Orgaue in gleicher Weise beeinflußen. Daß diese Fixierungsflüssigkeiten für gewöhnliche Zwecke trotz- dem brauchbare Resultate ergeben, ist wohl daraus zu erklären, daß beim Mikroskopieren nicht die kubische sondern die lineare Aus- dehnung in Betracht kommt. Bekanntlich ist die lineare Ausdehnung ein Drittel der kubischen, soweit es sich um kleine Zahlen handelt 5 bei größeren Zahlen noch weniger als ein Drittel. Nichtsdestoweniger bleibt der berechtigte Wunsch nach einer Fixierungsflüssigkeit, die das Volumen der Organe möglichst unverändert läßt. Wie sich gezeigt hat, verändern die Sublimatlösungen das Vo- lumen der Organe weniger als die übrigen Fixierungsmittel. Mir schien daher die Möglichkeit vorhanden, mit Hilfe des HgCU eine annähernd ideale Fixierungsflüssigkeit zu finden, wenn es gelänge, statt des Na Gl einen geeigneten Stott' zu wählen, der mit Sublimat kein komplexes Salz bilden kann. Diese Voraussetzung war gegeben bei Verwendung einer mit Hg 01.2 gesättigten Rohrzuckerlösung. Versuch 17. Fixierung in einer mit Hg Gl., gesättigten 789 p r z e n t i g e n R o h r z u c k e r 1 ö s u n g ^ ; Meerschweinchen. Leber: 5'G Proz. Schrumpfung J' 10 „ „ Niere : 13"1 Proz. Schrumpfung 12-0 Gehirn : 0-96 Proz. Schrumpfung Diese Lösung liat die Organe zum Schrumpfen gebracht. Otfen- bar addieren sich, Avenigstens in der ersten Zeit, bis genügend Sublimat eingedrungen ist , die Sublimatmoleküle zu den Zucker- molekülen. In den folgenden Versuchen sind schwächere Rohrzuckerlösungen verwendet worden. ^) Bei Berechnung aus den isotonisclien Koeffizienten entspricht osmo- tisch eine 7-89prozentige Roiirzuckcrlösung einer 0-9prozentigen NaGl- Lösung; cf. IIamüliugek, Bd. I, p. 24. XXIJI, 1. 8toeltzner: Einfluß der Fixierung auf d. Volumen d. Organe. 23 Versuch 18. Fixierung in einer mit IlgCL gesättigten 5p ro- zentiggn Rohrzuckerlösung; Meerschweinchen. Leber : 1"37 Proz. Schrumjjfung Niere : 206 Proz. Schrumpfung Milz: 4-52 Prozent Schrumpfung. Gehirn : 1-85 Proz. Schrumpfung Versuch 19. Fixierung in einer mit HgCl,, gesättigten i^/.ipro- zentigen Rohrzucker lös ung; Meerschweinchen. Leber: 1-7 Prozent Quellung _ Differenz Niere : Gehirn : 2-3 Proz. Schrumpfung 0-6 Prozent Quellung . 3.0 Versuch 20. Fixierung in einer mit HgCla gesättigten 4pro- z e n t i g e n R o h r z u c k e r 1 ö s u n g ; Meerschweinchen. Leber: 1'98 Prozent Quellung 2-1 Niere: 196 Proz. Schrumpfung „ Differenz Gehirn : 4"7 Prozent Quellung. Hoden : 4*4 Prozent Quellung Versuch 21. Fixierung in einer mit HgCl.2 gesättigten 3pro- zentigen Rohrzucker lös ung; Meerschweinchen. Niere : 4*47 Prozent Quellung 3-76 Hoden: 6'11 Prozent Quellung 5-45 Gehirn: 809 Prozent Quellung Bei Betrachtung der Versuche 18, 19, 20, 21 fallen sofort die geringen Voluraenveränderungen auf. Am deutlichsten tritt diese Tat- sache in Versuch 19 hervor. Die Abnahme der Schrumpfung geht mit der Abnahme der Konzentration des Rohrzuckers Hand in Hand. Bei der 4^/2prozentigen Zuckerlösung (Versuch 19) erreicht die Schrumpfung den Nullpunkt oder bewegt sich um denselben, um bei weiterer Verminderung der Konzentration in Quellung überzugehen. Wir hätten somit in dieser neuen Lösung (4^/2 pro- zentige Rohrzu ckerlösung mit Sublimat gesättigt) 24 8 1 o e 1 1 z n e r : Einfluß der Fixierung auf d. Volumen d. Organe. XXIII, 1. eine Flüssigkeit, die den Ansprüclien an eine naliezu ideale F i x i e r u n g s f 1 ü s s i g- k e i t genügen dürfte. Wie A'erliält sich nun der osmotische Druck der Fixierungs- flüssigkeiten zu den Yolumveränderungen der Organe? Folgende Tabelle zeigt die Gefrierpunktserniedrigung der ver- schiedeneu Flüssigkeiten. J Zenker sehe Flüssigkeit Formalin MtJLLERSche Flüssigkeit 7*89prozentige Rohrzuckerlösung mit HgCl., gesättigt 0'9prozentige Na Cl- Lösung mit HgCl, gesättigt . . Subhraat- Eisessig O'Gprozentige Na Cl- Lösung mit HgCU gesättigt . . öprozentige Rohrzuckerlösung mit Hg OL gesättigt . 4^/2prozentige Rohrzuckerlösung mit HgCL gesättigt, 7'89prozentige Rohrzuckerlösung 4^/2prozentige Rohrzuckerlösung 4prozentige Rohrzuckerlösung - Konzentrierte wässerige Subhmatlösung Konzentrierte wässerige Pikrinsäurelösung . . . . , OOoprozentige wässerige Cliromsäurelösung ... — 3-240 — 2-85« — 0-84" — 0-760 — 0-G90 ^0-(33o — 0-61» — O-Gl» — 0-57" — 0-450 — 270 — 0-240 -0-240 -0-170 — O-Oßo Es geht aus dieser Tabelle deutlich liervor, daß im allgemeinen die liypertouisclien Lösungen eine Schrumpfung, die jjypotonischen dagegen eine Quellung der Organe herbeiführen. Eine Ausnalime machen das Formalin, Sublimat-Eisessig und die Müller sehe Flüssig- keit; letztere beeinflußt allerdings nur das Gehirn im entgegen- gesetzten Sinne. Wie Hamburger^ nachgewiesen hat, wird durch Säuren das Volumen tierischer Zellen vergrößert. Die MtJLLERSche Flüssigkeit und ebenso die Pikrinsäure sprechen dafür, daß neben der Säure- wirkung auch andere noch unbekannte Faktoren bei der Volum- veränderung der Organe beteiligt sind. Weiter ist aus der Tabelle ersichtlich, daß un- sere neue Lösung als für Warmblüter i s o t o n i s c h be- zeichnet werden kann. ^) Hamburger, Bd. I, p. 330. XXIII, 1. Stüoltzner: Einlliili der Fixierung auf d. Voluiuen d. Organe. 25 Fasse ich noch einmal die Ergebnisse meiner Versuche zu- sammen, so kann icli folgende Schlüsse daraus ziehen: 1 ) D i e in der mikroskopischen Technik bisher üblichen F i x i e r u n g s f 1 ü s s i g k e i t e n lassen d a s V o 1 u m e n der Organe nicht u n v e r ä n d e r t. 2) Es werden nicht alle Organe in glei c h er S t är ke beeinflußt, z. T. auch nicht in gleichem »Sinne ver- ändert. Während die Pikrinsäure z. B. bei der Leber starke Schrumpfung hervorruft, wird das Volumen der Niere, der Milz und des Gehirns durch sie erheblich vergrößert. Ähnlich wirkt die Müller sehe Flüssigkeit (cf. Versuch 5). 3) N e b e n der osmotischen Konzentration der Fixierungsflüssigkeit spielen anscheinend auch an- dere noch unbekannte Faktoren eine Rolle bei der V 1 u m e n V e r ä n d e r u n g der Objekte. 4) In der m i t S u b 1 i m a t g e s ä 1 1 i g t e n 4^ /2 p r o z e n t i g e u Rohrzuckerlösung haben wir eine für Warmblüter i s 1 n i s c h e F i x i e r u n g s f 1 ü s s i g k e i t gefunden, in der d a s \' l II m c n der Organe so g u t wie u n v e r ä n d e r t bleibt. [Eingegangen am 27. Februar 190G.] 26 Somraerfeldt: Bildungsweise und Auflösung der Kristalle. XXIII, 1 Mikroskopische Beobachtungen über Biklungsweise und Auflösung der Kristalle. Von Ernst Soiiinierfeldt iu Tübiugen. Einleitung. In vieler Hiusiclit bestellt bekanntlich eine große Analogie zwischen dem Übergang aus dem gasförmigen in den flüssigen und aus dem flüssigen in den festen Zustand. Manche mikroskopische Beobachtungen lassen aber dennoch Unterschiede erkennen, welche zu Zweifeln an der Zulässigkeit jener Analogie berechtigen und be- sonders die Frage einer näheren Diskussion zu unterwerfen zwingen, ob die Kristallisation ein umkehrbarer Vorgang ist, d.h. ob zwischen der Auflösung von Kristallen und dem Sieden von Flüssig- keiten die gleichen Analogien bestehen , wie zwischen der Bildungs- weise beider Aggregatzustände. In einer Fortsetzung dieser Ab- handlung hoflfe ich später von einem allgemeineren Standpunkt aus die mikroskopischen Beobachtungen über die Bildungsweise der Kri- stalle zusammenzustellen ; die Wichtigkeit der Frage über die Um- kehrbarkeit des Kristallisationsvorganges dürfte es indessen recht- fertigen, daß ich die hiermit zusammenhängenden Publikationen zunächst ausschließlich behandele und eine Reihe von eigenen Ver- suchen diesem bisher nur unvollständig behandelten Problem gewidmet habe ; diese Versuche werden im zweiten Teil der vorHegenden Arbeit beschrieben. Die Frage nach der Umkehrbarkeit des Kristallisationsvorganges ist engstens verknüpft mit der besonders wichtigen , ob die Sätze über das chemische Gleichgewicht sich auf diesen Prozeß anwenden lassen , welche in der physikalischen Chemie bei der Behandlung des Verdampfens , Lösens , sowie des Schmelzens , ferner bei der Behandlung umkehrbarer, chemischer Reaktionen eine wächtige Rolle spielen. Diejenigen mikroskopischen Erscheinungen nun, welche der Umkehrbarkeit des Kristallisationsprozesses vollkommen zu wider- XXIII, 1. Sonimerfeldt: Bildungsweise und Auflösung der Kristalle. 27 sprechen scheinen, sind die Atzfiguren und ähnliche bei der Auflösung von Kristallen auftretende liildungen ; es ist daher Zweck dieser Abhandlung in erster Linie die Erscheinungen der Ätzfiguren zur Erledigung der genannten Frage heranzuziehen. I. Allgemeines über Ätzfiguren. Obgleich in einzelnen, seltenen Fällen bei natürlich gebildeten Ätzfigureu von Mineralien diese durch Lösungsmittel hervorgebrachten regelmäßigen Vertiefungsfiguren schon makroskopisch ihre Einzel- heiten erkennen lassen, so ist doch in den gewöhnlichen Fällen das Studium derselben nur bei beträchtliclien Vergrößerungen möglich, es lassen alsdann die Ätzfiguren eine in engstem Zusammenhang mit der kristallographischen Symmetrie stehende Form erkennen. Das Wesentlichste für uns ist nun , daß sich dieselben ausschließlich bei dem Kleinerwerdcn, nicht bei dem Wachstum eines Kristalles bilden. Wenn man einen mit Ätzfiguren versehenen Kristall wachsen läßt, so beginnt sogar der Wachstumsprozeß damit , daß sich die Ätz- figuren ausheilen, um darauf längs vollkommen ebener Flächen fort- zuschreiten. Als Ätzfiguren im engeren Sinne bezeichnet man die- jenigen Vertiefungs- oder Erhöhungsfigureu , w^elche durch ein Lösungsmittel hervorgebracht werden ; erfolgt die Volumabnahme des Kristalls durch Schmelzen oder Zersetzen, so spricht man analog von Schmelz- und Zersetzungsfiguren. Bei allen diesen Erscheinungen scheint die Kristallstruktur — so wenigstens lautete die bisherige Auffassung — einen einseitigen, d, h. nichtumkehrbaren Einfluß aus- zuüben, für den man bei den übrigen Aggregatzuständen kein Analogon erkannte. So glaubte man denn auch , daß die Ätzfiguren ein be- sonders geeignetes Mittel zur Erkeunung der kristallbildenden Kräfte, sowie anderseits zur Erforschung der Kristallstruktur liefern ; z. B. macht L. Wulff ^ darauf aufmerksam, „daß es ja schon den Be- trachtungen der Ätzfiguren gelungen ist, einzelne Richtungen, die nicht durch die Raumgitterstruktur allein bedingt sein können, auf Kristallflächen als wesentliche darzustellen" und spricht im Anschluß daran die Zuversicht aus, daß man es bald werde entscheiden können, „welche Struktur die Kristallelemente selbst haben". Auch aus dem 1) Vgl. Zcitschr. f. Krist. Bd. XIII, 18H8, p. 5GG. o.S Soimnerfeldt: BiUlungsweise und Auflösurii^ der Kristalle. XXIII, 1. von Retgers ^ aufgestellten Satze, daß isomorphe Körper gleiche Atzfig-iiren besitzen", sollte man einen engen Zusammenliang zwischen Kristallstruktur und Ätzfiguren folgern , denn isomorphe Substanzen besitzen gleichartigen Aufbau aus ihren Elementarformen. Baumhauer ^ erhofft von der Untersuchung der Ätzerscheinungen sogar, daß die- selben „insbesondere auch ein Mittel an die Hand geben werde, die relative Lage der verschiedenartigen Atome im Kristall, bezw. in den Molekülen desselben zu erforschen". Von besonderem Interesse für die Theorie der Ätzerscheinungen ist der Fall , daß ein Kristall von seiner eigenen Lösung , die aber natürlich nicht vollkommen gesättigt sein darf, geätzt wird. Da durch den Ätzungsvorgang selbst die Konzentration der Lösung erhöht wird , ist es — sofern nur die Oberfläche , welche der Einwirkung ausgesetzt wird, genügend groß gewählt war — möglicli einen Endzustand der Auflösung zu erreichen, bevor letztere noch zu einer gänzlichen Zerstörung der Oberfläche führt. Die Hauptfrage , mit w^elcher wir uns beschäftigen , lautet nun so : Ist dieser Endzustand ein wirklicher Gleichgewichtszustand, oder ist für denselben die Lösungsgeschwindigkeit ausschlaggebend'? Denn bei der Einwirkung ungesättigter Lösungen hat man strenge zwischen der Lösliclikeit selbst (Lösungstension, und gleich der von der Volumeneiuheit des Lösungsmittels aufnehmbaren festen Substanz) und der Lösungsgeschwändigkeit zu unterscheiden. Für Gleichgewichtszustände kommt es lediglich auf die Löslich- keit, nicht auf die Lösungsgeschwindigkeit au. Zunächst spricht die schon erwähnte Tatsache , daß nur von einer Seite aus , d. h. nur beim Kleinerwerden des Kristalls sich eine Bedeckung mit Ätzfiguren erzielen läßt , gegen ein stabiles Gleichgewicht. Die Mehrzahl der stabilen Gleichgewichtszustände ist beiderseits erreichbar; nur für manche dem hier behandelten Gebiet aber sehr fernstehende Adsorptionen scheint die Einstellung sehr viel leichter von der einen Seite aus als von der anderen zu erfolgen (Lagregen, Bih, t. Sv. Vet. Ak. XXIV, Afd. II). Anders verhält es sich aber für metastabile GleichgcAvichtszustände , wie z. B. übersättigte Lösungen sie darbieten. In dem einen Sinne, nämlich durch Konzen- 1) Vgl. Zeltschr. f. physik. Clieiu. IM. XVIII, ISOä, p. 077. -) Allerdings besitzt dieser Satz einzelne Ausnahmen. •'') Die neuere Entwicklung der Kristallographie. Braunsciiweig l'JUä. p. lOG. XXIII, 1. Somiuerfeldt: Uildungsweise und Auflösung der Kristalle. 29 trationszunalirae der Lösung , läßt sicli weit über das stabile Gebiet hinaus ein vollkommen stetiger Fortschritt des Vorganges realisieren, die Konzentrationsabnahme hingegen vollzieht sich bei der Anwesenheit von Keimen unstetig, indem explosionsartig sich momentan der wahre Gleichgewichtszustand herzustellen strebt. Die Analogie dieses Vor- ganges mit der Bildung von Ätzfiguren wird im folgenden noch deutlicher hervortreten, aber schon jetzt wollen wir auf die wichtige Rolle hinweisen, welche Keimwirkungen auf das Zustandekommen von Ätzfiguren ausüben. Zu solchen Keimwirkungen geben alle Verletzungen, sowie alle durch Sprünge, Risse u. dgl. beschädigten Partien, wie sie in Klein- heit stets bei nicht direkt im Wachstum befindlichen Kristallen auf- treten , Anlaß. Denn die beim Wachstum sich bildenden Flächen sind die lösungsunfähigsten unter den überhaupt denkbaren (also etwa durch künstliches Anschleifen erzielbaren). Jede Verletzung der natürlichen Oberfläche bietet also ein , wenn auch nur mikro- skopisch kleines Gebiet dar, welches lösungsfähiger als die eigent- liche, natürliche Umgrenzung ist. Man hat eine jede solche verletzte Stelle als einen kleinen abgetrennten Bereich zu betrachten, der die widerstandsunfähigsten Begrenzungselemente enthält und einem Satz von Ostwald zufolge, nach welchem der Übergang der unbeständig- sten Modifikation in die beständigste sich derart vollzieht , daß die Stufen der mittleren Beständigkeit, welche etwa möglich sind, nicht ausbleiben, ist auch hier zu erwarten, daß zwar schließlich die zu unregelmäßigen Krümmungen sich zusammensetzenden Begrenzungs- elemente zunächst gewissen begünstigteren ebenen Flächen Platz maclien , aber doch nicht sogleich den am allermeisten widerstands- fähigen. Bei weiterem Angriff allerdings muß ein Ausgleich der geätzten Stellen im Vergleich zu den natürlichen Flächen wegen der weiterfortschreitenden Annäherung an die beständigste Konfiguration eintreten. Der experimentelle Nachweis für die Bedeutung derartiger Homogenitätsstörungen bei der Bildung von Ätzfiguren ist auf mehr- fache Weise bereits früher geführt worden ; besonders sei auf fol- genden Versuch Baumhauers hingewiesen: Von einer durch voll- kommene Spaltbarkeit ausgezeichneten Substanz wurde eine nicht zu dünne Platte durch nochmaliges Spalten in zwei Teile zerlegt und die beiden dadurch entstandenen Flächen wurden sofort nach ihrer Bildung in vollkommen gleicher Weise der Einwirkung eines Lösungsmittels ausgesetzt. Hierbei zeigte sich, daß auf den vor der 30 Sommerfeldt: Bildungsweise und Auflösung der Kristalle. XXIII, 1. Spaltung aneinander liegenden Flächenseiten die Ätzfiguren in einer vollkommen gleichen Weise sich bildeten. Die genannten Inhomo- genitäten , welche wir uns als auslösende Ursachen bei der ersten Entstehung der Ätzfiguren dacliten, sind nach Baumhauer ^ als sub- mikroskopisch vorzustellen, alle Beschädigungen, welche mikroskopisch erkennbar sind, scheinen bereits zu groß zu sein, um noch durch regelmäßige Ätzfiguren „ausgeheilt" werden zu können. Man kann den Vorgang der Bildung einer einzelnen Ätzfigur als einen dem Kristallwachstum 1) reziproken und 2) an viel kleinere Dimensionen gebundenen Vorgang bezeichnen. Beim Kristallwachstum können abgerundete Formen nur sofern sie klein sind, gegenüber denjenigen größten Endfurmen, welche unter den jeweiligen Versuchsbedingungen erzeugbar sind , zu den normalen Kristallformen ergänzt werden ^ und in ähnlicher Weise scheinen auch nur solche Aushöhlungen, welche klein sind im Vergleich zu den ihrerseits meist mikrosko- pischen größten Ätzfiguren in solche umgebildet werden zu können. Ein weiteres Argument, welches für die Keimwirkung submikro- skopischer Inhomogenitäten bei der Bildung von Ätzfiguren spricht, ist in einigen Beobachtungen Klockes enthalten (vgl. auch Lehmann, Molekularphysik Bd. I, p. 497), welche dieser mit den Worten be- schreibt : „Im Augenblick des Einlegens (von Alaunkristallen in Wasser) bedecken sich die Flächen über und über mit Ätzfiguren, aber nach einigen Minuten pflegen schon weniger vorhanden zu sein, dann ver- schwinden im Verlauf der ersten viertel oder halben Stunde sämt- liche Ätzfiguren in der Nähe der schon zugerundeten Kanten . . . Bei andauernder mikroskopischer Beobachtung . . . fällt die keinerlei Veränderung erleidende Größe der Ätzfigureu sogleich auf, und durch wiederholte Messung der Seitenlängen von Ätzfiguren mit einem Glas- mikrometer bei verschiedenen Vergrößerungen überzeugte ich mich, daß in der Tat diese Lösungen, so lange die Figur überhaupt sicht- bar war, unverändert blieben." (Zitiert nach Lehmann, 1. c.) Die Beobachtungen, welche beweisen, daß mikroskopisch sicht- bare Inhomogenitäten bereits eine entsprechende Verzerrung der Ätzfiguren bewii'ken, sind sehr zahlreich, und finden sich als Neben- bemerkungen in zahlreichen Abhandlungen. Hier sei nur erwähnt. ij Vgl. Zeitschr. f. Krist. Bd. XXX, 1899, p. 97 ff. 2) Über die besonderen Erscheinungen , welche eintreten , wenn die der Lösung dargebotenen Körper ihre Dimensionen nicht mehr wesentlicli durch Wachstum vergrößern können vgl. Rauber, Die Regeneration der Kristalle, XXIII, 1. Sommer feldt: Bildungsweise und Auflösung der Kristalle. 31 daß ich selbst bei den im zweiten Teil zu beschreibenden Ätzversiichen am Kalkspat oft Gelegenheit hatte, Partien, w^elche äußerst schmale Zwillingslamellen eingeschaltet enthalten , zu ätzen und stets eine starke und abnorme Veränderung der Ätzfiguren in unmittelbarster Nähe der Zwillingsgrenzeu wahrnahm. Die einzigen Kristalle , welche frei sind von den im vorigen genannten submikroskopischen Inhomogenitäten, auf welche wir die Ätzfigurenbildung zurückführen , sind die im Wachstum innerhalb ihrer Mutterlauge oder innei'halb ihres Schmelzflusses befindlichen. Denn es ist gerade die Tendenz des Wachstumsvorgauges etwa vor- handene Ätzfiguren, resp. die sie hervorrufenden rudimentären Strukturstörungen zu beseitigen. Als Beweis benutzen wir einige Beobachtungen Klockes, welche derselbe durch mikroskopische Unter- suchung geätzter und alsdann in eine gesättigte Lösung gebrachter Alaunkristalle gewann.-^ Das in der gesättigten Lösung natürlich eintretende Wachstum begann damit, daß „die zuerst abgeschiedene Menge sich, so weit erkennbar, ausschließlich in der Tiefe der vor- handenen Ätzfiguren absetzte, dieselben von unten herauf regelmäßig erfüllend. War die Ausfüllung vollendet und die Glattflächigkeit somit hergestellt, so wuchs der Kristall nun auf seiner ganzen Ober- fläche einheitlich und glattflächig weiter, ohne einzelne, selbständige Fortwachsungeu auszubilden". Als Gesamtresultat finden wir also , daß beim Wachstum ein Kristall der Forderung die Oberfläche zu einem Minimum zu machen, strenge genügt, daß aber bei der Auflösung metastabile Abweichungs- zustände von dieser durch die Existenz einer Oberflächenspannung an der Grenze fest-flüssig bedingten Forderung sich einige Zeit er- halten können. Ganz fehlen übrigens auch beim Wachstum derartige metastabile und durch stabilere Anordnungen der Materie verdräng- bare Bildungen nicht und wiederum hat Klocke (1. c.) die relativ vollständigsten Beobachtungen auf diesem bisher wenig bearbeiteten Gebiet angestellt. Klocke unterscheidet bei oktaederförmigen, mikroskopischen Alaun- kristallen vier verschiedene Fortwachsungsarten und sagt speziell über die zweite zu flachen Pyramidenoktaedern an Stelle von wirk- lichen Oktaedern führenden Typus : „Die hier in Frage kommenden Fortwachsungeu kamen stets nur vereinzelt vor und w-aren niemals imstande sich so zu vermehren und zu vergrößern , daß sich der *) Vgl. Verbandl. d. naturforsch. Gesellsch. zu Freiburg Bd. VIT, 1878. 32 Somraerfeldt: Bildungsweise und Auflösung- der Kristalle. XXIII, 1. Kristall auf diese Weise wirklich fortbilden konnte. Trat letzteres durch bedeutende Substanzabsclieidung ein, so geschah es stets durch Fortwachsungen der ersten und dritten Art, Avelche diese zur Fort- bildung des Kristalles so zu sagen, unfähigen Pyramiden über- Avucherten und verdrängten." Um schließlich noch zu der Frage Stellung zu nelimen , ob die größere Widerstandsfälligkeit der natürlichen Umgrenzungsflächen im Vergleich zu den übrigen durcli Unterschiede in der Löslichkeit (Lösungstension) oder der Lösungsgeschwindigkeit bedingt wird, so bemerken Avir, daß erstere Annahme wenig wahrscheinlich ist. Zahl- reiche , aber meist nicht dem mikroskopischen Gebiet angeliörige Versuche spreclien dafür, daß die Lösungstension entweder überhaupt nicht, oder doch nur in sehr geringem Maße mit der Richtung in einem Kristall sich ändert, daß hingegen die Lösungsgeschwindigkeit in sehr hohem Maße von der Richtung abhängt , und daß letzterer Verschiedenheit demnach die Atzfiguren ihre Entstehung verdanken, daß sie aber im stabilen Gleichgewichtszustand zwischen Kristall und Lösung nicht bestehen können. Ein scheinbarer Widerspruch gegen diese Auffassung beruht darin , daß einzelne Erzeugungsmethoden der Atzfiguren eine sehr lange Einwirkung des Lösungsmittels erfordern ; indessen zeigt eine Durchmusterung dieser Fälle , daß in ihnen allen das Lösungsmittel nur eine sehr schwache Einwirkung auszuüben fähig ist. Nun haben aber zahlreiche Erfahrungen gezeigt, daß die Lösungsgeschwindigkeit um so kleiner ist, je kleiner die erreichbare Lösungstension ist, d. h. Körper, welche sich sehr schwach lösen lassen, lösen sich zugleich sehr langsam. AVenngleich dieser Einwand somit hinfällig ist, so schienen positive Beweise auf experimentellem Wege dennoch für unsere Er- klärungsweise der Ätzfiguren keineswegs überflüssig und ich glaube durch die nunmehr zu beschreibenden, eigenen mikroskopischen Be- obachtungen überzeugend dartun zu können , welchen Einfluß im einzelnen Fall die Reaktionsgeschwindigkeit ausübt. IL Ätzversuche an sehr rasch bewegten Kalkspatkristallen. Wenn Avirklich die Realvtionsgeschwindigkeiten und vielleicht die innerhalb der Lösung durch dieselben bedingten Höfe verscliieden XXIII, 1. Sommerfeldt: Bildungsweise und Auflösung der Kristalle. 33 konzentrierter Scliichten eine entscheidende Rolle für die Art der Ätzung bilden , so mußte durch intensive Bewegung des Kristalles während der Ätzung eine merkliche Änderung des Phänomens zu erwarten sein ; ich bediente mich folgender Prüfungsmethode zur Entscheidung dieser Frage : Ein kleines Bruchstück von Kalkspat wurde mit Wachs auf eine kleine Kreisscheibe aufgekittet, welche mittels eines entsprechenden Stieles an einer biegsamen Welle , wie sie von Zalinärzten als Bohrmaschine verwandt wird, befestigt wurde. Die Kreisscheibe wurde in ein mit dem Lösungsmittel gefülltes Becher- glas eingetaucht und mittels eines Elektromotors die Welle in sehr rasche Rotationen^, welche um eine vertikale Achse erfolgten, ver- setzt. Hierbei zeigte sich zunächst, daß eine fast homöopathische Verdünnung der Säuren bereits genügte, um unter diesen Umständen Ätzfiguren am Kalkspat zu erzeugen." Die Gestalt erwies sich 1) als stark abhängig von der Be- schaffenheit der Säure , 2) veränderlich mit der Temperatur und 3) wesentlich verschieden von den ohne Bewegung des Kristalles erzeugbaren. War das Ätzungsmittel Salzsäure, so ließ sich bei etwa 200facher Vergrößerung deutlich die Gestalt von Pyramiden, welche ein Fünf- eck als Basis besaßen, erkennen, und zwar verliefen von der Spitze der Pyramide 5 Kanten nacli den Ecken der Basis. Die Seiten des Fünfeckes waren paarweise einander gleicli , indem sie sym- metrisch zu der Symmetrieebene, welche auf der Spaltungsfläche senkrecht steht, sich befanden. Wälirend diese Einwirkung bei Zimmertemperatur erzielt wurde, ergaben sich in erhitzter Salzsäure ganz andere Ätzfiguren. Hierbei wurde das Spaltblättchen nicht mittels Wachs, sondern mittels einer kleinen Metallklammer, welche einer Pinzette ähnlich geformt war, gehalten und es ließen sich Pyramiden mit deltoidförmiger Basis erhalten, welche von 4 die Spitze mit Ecken der Basis verbindenden Kanten begrenzt waren. 1) 1200 pro Minute. ^) Indessen ist dieser relativ kostspielige Apparat, welcher mir zu- fäUigerweise zur Verfügung stand, keineswegs notwendig; da die ver. brauchte Kraft minimal ist, genügt vollkommen eine RAABEsche Turbine des kleinsten für Laboratoriumszwecke gebräuchlichen Modells, welche sich mit Leichtigkeit in die zur Anwendung einer starren Verbindungsachse von Kristall und Motor erforderliche Lage bringen läßt; oder, wenn nötig, kann hierbei ein eng gewundener Spiraldraht, ebensogut wie unsere bieg- same Welle, die Übertragung der Bewegung vermitteln. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXIII, 1. 3 ;;4 Somiiierfeldt: Bildungsweise und Auflösung der Kristalle. XXllI, 1. Diejenige Diagonale , welche das Deltoid und damit auch die pyra- midenförmige Ätzfigur symmetrisch teilte, lief derselben Symmetrie- ebene parallel wie die Halbierende des Fünfecks im ersten Fall. Wurden die Kristalle ohne Bewegung geätzt, so ergaben sich die gewöhnlichen bereits von früheren Autoren mehrfach beschrie- benen Ätzfiguren. ^ War somit festgestellt, daß die Ätzfiguren nicht, wie Becke gelegentlich meinte,- ungeändert bleiben, solange die chemische Reaktion , welche vor sich geht , keine Änderung erfährt , so trat dieses Resultat noch eklatanter durch folgende Versuche hervor : Bestünde ein einfacher Zusammenhang zwischen chemischer Reaktion und dem Typus der Ätzfiguren, so müßten dieselben sich nicht ändern, wenn statt Wasser Alkohol zum Verdünnen der Salzsäure verwandt wird, sofern nur die Konzentration der Salzsäure in beiden Fällen dieselbe ist. Tatsächlich indessen ließ sich eine starke Abhängigkeit von dem Alkoholgehalt nnd zugleich wiederum von der Temperatur und Bewegung konstatieren. Heiße alkoholische Salzsäure erzeugte dreieckige A'ertiefungs- figuren, und zwar waren die entstandenen Dreiecke gleichschenklig und es lief ihre die Basis halbierende Mittellinie der früher ge- nannten Symmetrieebene parallel ; bei gewöhnlicher Temperatur ent- standen tafelförmige Vertiefungsfiguren, welche ähnlich wie eine der früher beschriebenen Arten von Deltoidcn begrenzt Avurden , jedoch gingen nicht wie früher von den Ecken der Deltoide schräge Kanten nach einer gemeinsamen Spitze aus , es konnten also die jetzigen Vertiefungsfiguren nicht als Pyramiden aufgefaßt werden. Aus allem dürfte sich ergeben, daß nur die Symmetrie der Ätz- figuren konstant bleibt, daß hingegen ihre Gestalt von sehr gering- fügigen Nebenursachen stark beeinflußt wird, daß ferner die Ge- schwindigkeit, mit welcher der chemische Angriff erfolgt, sehr wesent- lich ist und die Ätzfiguren nicht einem Gleichgewichtszustand zwischen der festen und flüssigen Phase entsprechen können. Hieraus aber folgt für die Frage, von welcher wir ausgingen, das Resultat: Die Erscheinung der Ätzfiguren steht nicht im Widerspruch zu der Auf- fassung, daß Wachstum und Auflösung reziproke Vorgänge seien; alle ])hysikocheniischen Sätze über das chemische Gleichgewicht kann 1) Vgl. z. B. Lehmann, Molekularphysik Bd. I, p. 494 u. Fig. 273. ^) Vgl. TscHERMAKS luineral. u. ])etr. Mitt. XXIII, 1. Bender: Einfacher Beleuchtun.i?sapparat f. Lupenpräparation. 35 man in der nämlichen Weise auf den ('bergang liüssig-kristallin an- wenden, als ob die Zu- oder Abnahme des Volums längs vollkommen ebenen Flächen erfolgte. [Eingegangen am r2. Dezember 1905.] Ein einlixcher Beleuchtungsapparat für Lupen- präparation und Mikroskopie. Von Dr. 0. Bender, Anatomisches Institut, Heidelberg. Hierzu zwei Holzschnitte. Vorstehender Beleuchtungsapparat verdankt seine Entstehung zunächst dem persönlichen Bedürfnis, subtile Nerveupräparationen mit Hilfe der BRAus-ÜRtiNERSclien binokularen Präparierlupe, unabhängig vom wechselnden Tageslicht, zu jeder Zeit und unter den gleiclien Lichtverhältnissen ausführen zu können. Die Vorrichtung ist so ein- fach," leicht transportabel, nicht kostspielig und hat sich mir in ein- jährigem Gebrauch so bewährt, daß ich eine Abbildung und kurze Beschreibung davon gebe. Vielleicht komme ich damit ähnlichen Wünschen anderer entgegen, zumal da die Vorrichtung auch für mikroskopische Untersuchungen bei mangelhaftem' natürlichem Licht verwendet werden kann und also für einen größeren Kreis Literesse bietet. Die an ihren Enden um etwa 45^ abgebogene Stange a trägt am einen Ende eine Klammer mit Klemmschraube zur Befestigung am horizontalen Arm einer der gebräuchlichen Stativgaslampen oder an einem Gasarm. Die Stange mit dem Apparat kann längs des Gasarmes vor- und rückwärts verschoben werden. Am andern Ende der Stange ist die Beleuchtungsvorrichtung befestigt und im Punkte .r um eine Achse drehbar, welche durch das Ende der Tragstange 3* 36 Bender: Einfacher Beleuchtungsapparat f. Lupenpräparation. XXIII, 1. geht; aus der verschiedenen Stellung des Planspiegels h in Figur 1 u. 2, welcher einmal von unten sichtbar, das andere Mal von oben durch die Rückseite verdeckt ist, sind diese Drehungen ohne weiteres verständlich. Der Apparat selbst besteht im wesentlichen aus dem Plan- spiegel b und der B i k o n v e x 1 i n s e c, welche durch ein Winkel- gelenk derart miteinander verbunden sind, daß sie stets gleich- sinnig verschoben werden. 1. Zu diesem Zweck ist zunächst die Linse im l'unkte x unbeweglich fixiert; sodann trägt der Spiegel an seiner Längsseite eine senk- recht auf einer Ebene stehende, mit ihm fest verbundene Führungs- schiene f/, in welcher ein Metallknopf gleitet, welcher auf dem Scheitel eines Winkelgelenkes mit gleichlangen Schenkeln befestigt ist. Diese Führung zwingt den Spiegel, stets eine solche Mittelstellung zwischen Licht({uelle und Linse einzunehmen, daß die auf den Spiegel auf- fallenden Lichtstrahlen so reflektiert werden, daß sie die Linse passieren müssen. Die 'Abbildungen erläutern diesen Vorgang besser XXIII, 1. Bender: Einfacher Beleuchtungsapparat f. Lupenpräparation. 37 als jede Beschreibung. Die rote Linse bezeichnet den jedesmaligen Weg der Lichtstrahlen bei verschiedenen Stellungen des Apparates. Der Durchmesser der von mir verwendeten Linse beträgt 5*5 cm, die Brennweite 25 cm; die Maße des Spiegels sind 5:8 cm. Etwaige Abänderungen der Befestigung, der Linsengröße etc. für andere Zwecke sind natürlich leicht vorzunehmen, Verstellungen des Apparates sind also möglich: eventuell durch Heben und Senken gleichzeitig mit dem Lampenarm am Stativ, durch 2. Verschieben der ganzen Vorrichtung am horizontalen Gasarm, durch Drehung derselben im Punkte x zum Beschauer oder von diesem fort, durch Ab- oder Abduktion der Linse von oder zur Licht- quelle , wobei der Spiegel in oben erwähnter Weise folgt. Zur Verstärkung der Lichtquelle dient ein weißer Tonzylinder mit Aus- schnitt. Um den Untersucher, welcher bei Figur 1 u. 2 hinter dem Apparat sitzend gedacht ist, gegen die Blendung durch das grelle Licht zu schützen, die bei längerer Arbeit sehr unangenehm würde, ist auf die Tragstangen ein schwarzer Blechschirm mit entsprechend 38 Pauly: Ein einfaches Kompensatorokular. XXIIl, 1. abgebogenen Ecken aufgesetzt, zur Befestigung dienen zwei federnde Klammern, Mit diesen einfachen Mitteln ist also eine Vorrichtung gewonnen, welche erlaubt, das Licht von einer beliebigen Lampe mit einer gewissen Beschränkung nach allen Richtungen des Raumes abzu- lenken und auf einen Punkt zu konzentrieren. Die Vorrichtung wurde von mir in Verbindung mit Herrn Meclianiker Fr. Runne konstruiert und wird von letzterem im phy- siologischen Institut hierselbst jederzeit angefertigt. Der Preis (15 M.) ist nicht zu lioch gegriffen. Heidelberg, 1. Februar 1906. [Eingegangen am 3. Februar 1906.] Ein einfaches Kompensatorokular. Von Anton Panly in Wien. Ein Kompensatorokular, welches den meisten Anforderungen der Praxis entspricht, kann man sicli leicht aus jedem Huygiiens- schen Okular darstellen.^ Zu diesem Zwecke befestigt man auf dem Diaphragma des- selben ein Grlasmikrometer, bei dem 5 oder 10 mm in 50 oder 100 Teile geteilt sind, die geteilte Seite nach unten, und auf dem Glasmikrometer klebt man mit Kanadabalsam einen Gips- oder Quarzkeil. Dieser Keil, der wegen der leichteren Herstellung ^) Es sei noch erwähnt, daß J. Amann in dieser Zeitschrift (Bd. XI, 1895, ]). 440), sowie C. Zeiss im Neuen Jahrbuch (Bd. X, p. 425) unter dem Namen Bir efr ak tome ter ein auf ähnlichen Prinzipien beruhendes Instrument beschreiben, das jedoch komplizierter gehalten, auch genauere Messungen gestattet, während mein Instrument lediglich für orientierende Messungen geei^-net ist, wie sie auch später in einer vom Verf. zu ver- üft'entlichendcn 'rul)clle zur mikroskupisclien Bestiiumiing von Mineralien Verwendung linden sollen. XXIII, 1. Pauly: Ein einfaches Korapensatorokular. 39 die Farben liöherer Ordnung zeigt, wird durch eine Gipsplatte der- art kompensiert, daß das Eisengrau der ersten Ordnung, also der Nullwert der Interferenzfarben mit einem Anfangspunkt der Mikro- meterskala übereinstimmt. Man hat dabei darauf zu achten, daß der Keil gleichmäßigen, konstanten Neigungswinkel hat, der l*' bis 2*^ betragen soll, und daß bei der Kombination der beiden Gips- platten die Elastizitätsachsen genau senkrecht aufeinander stehen, also «^ des Keiles parallel zu f., der Platte, und c^ des Keiles parallel zu a.^ der Platte sind. Schließlich klebt man den Keil so über den Glasmikrometer, daß die I n t e r f e r e n z s t r e i f e n parallel der Skalenteilung sind.^ Das Ganze bedeckt man mit einem runden Deckglas, das so groß ist, daß es noch in das Okular geht. Die Auswertung geschieht im Natriumlicht, indem man von einem dunklen Streifen bis zum nächsten die Anzahl Skalenteile ab- Hest, und die Wellenlänge (0'000575 mm für Na-Licht) durch die Anzahl der abgelesenen Teile dividiert. Man erhält nun den Wert der Phasendifferenz für einen Teil der Skala. Um die Doppelbrechung des betreffenden Körpers zu messen schiebt man denselben auf den Objekttisch, stellt mit einem Okular entsprechender Stärke ein , wobei man das so hergerichtete Okular verwendet. (Am besten eignet sich ein Okular I, II oder III.) Dann setzt man den aufsetzbaren Analysator über das Okular, das wie ein anderes im Tubus steckt. Endlich verschiebt man das Objekt so lange längs der Skala , bis es irgendeine Stelle der Inter- ferenzfarbenreihe kompensiert hat. Man hat, da das Okular so in den Tubus gesteckt wird , daß die Elastizitätsachsen 45*^ mit den Nicolschnitten bilden, was sich an der Lage der Mikrometerskala leicht kontrollieren läßt, das Unter- suchungsobjekt ebenfalls in solche Stellung zu bringen, aber um 90^ gedreht, so daß die «-Achse des Gipskeils über der Achse kleinerer P^lastizität (c) des Objektes zu liegen kommt. Die Stelle, an der Kompensation stattfindet, wird an den Teil- strichen der Mikrometerskala abgelesen^, und die Anzahl der Teil- striche (vom Nullpunkt der Interferenzfarben aus) mit der für einen Teilstrich gefundenen Phasendifferenz A multipliziert. Eventuell kann ^) Der Keil muß so geschliffen sein, daß entweder a oder c (u oder y) resp. w und i parallel der Keilkante sind. ^) Die Zehntel lassen sich leicht schätzen. 40 Pauly: Ein einfaches Kompensatorokular. XXIII, 1. mau beiläufig bei gewöhnlichem Licht kompensieren, und diinu genau bei monochromatischen. Ein Beispiel soll das Gesagte erläutern: Mein Gipskeil hat einen Neigungswinkel von 1° 49' zirka. Einer Wellenlänge bei Na -Licht entsprechen 17*o Teilen. Demnach ent- sprechen einem Teil O'OOOöTö : 17'5 =0'00003285 mm Phasen- difterenz = A. Bei einem Gipsblättchen von 0*055 mm Dicke war die Ver- schiebung gleich 16*8 Teilen. Daraus berechnet sich aus der Formel T>-Je-L, ■= 0-0100, wobei ein Fehler von 0-000033 X 0-2 0-055 = 0-00012 möglich ist (bei Schätzung der Zehntel). Im Maximum bei einer Dicke des Dünnschlifles von 0-02 mm beträgt der mögliche Fehler 0-W0033^> ^\w \ \^y7W?^ ~ T 1/ 7)' Cife 34. X li l\\\\\\\\\\\M <,^ A\'"\\\ ' '\\.v^i -jy 35 Platine chariot i)öiir disqnes pcrl'ores ou non perfores. bord II qui rendrait le disque accessible a la main gauche pour determiner le mouvement de rotation. Les deux systemes des disques et les appareila dont on se servira pour les etudier auront certainement leurs partisans, ils ont tous les deux des avantages particuliers en raison des usages que Ion en fera. L'emploi des disques de grande dimension , sur lesquels on arrangera des longues series de coupes du Systeme nerveux sans avoir besoin de les recouvrir de couvre-objets de nieme dimension sera prefere par les neurologistes qui adajjteront le Systeme des disques troues, aux statifs de Zeiss pour l'etude des grandes coupes du cerveau, au statif de Dollken, et a cenx de Reichert dout la tige coudee a ete rejetee en arriere. 172 Lebrun: Application de la methode des disques rotatifs. XXIII, 2. Ceiix qui arrangeront sur le tour des disques de graude diniension im grand nombre d'objets difterents sous des coiivre-objets de tbrmuts employes actuellement , ainsi qu'on le fera certainement dans les Musees d'Histoire naturelle, dans les appareils automatiques pre- fereront aussi le Systeme des disques troues au centre. Le Systeme des disques non perfores sera employe par ceux qui voudront arranger sous uu meme couvre-objet des series entieres de coupes , d'un meme animal, d'un embryon, d'un organe. Les dispositifs qui les utiliseront limiteront naturelleraent leurs dimensions et nous pensons que des disques de 15 centimetres de diametre seront les plus grauds qu'on pourra penser a employer. Nous en avons fait construire de trois dimensions de 5, 10 et lö centimetres. Conclusions. Les avantages de lintroduction des disques rotatifs dans la teclinique microscopique sautent aux yeux des moins clairvoyants. Economic de temps , d'espace et d'argent en utilisant tonte la sur- face disponible pour y arranger les preparations. Kaccourcissement des ^/. de toutes les manipulations, au travers des reactifs colorants et autres. U est, en eft'et, possible de placer^sur un disque de 10 centimetres de diametre autant de coupes que sur 10 preparations de format anglais ordinaire 76x26. Toutes les manipulations seront faites en une fois , tandis qu'actuellement il faudrait les repeter 10 fois. II en resulte evidemment une grande economic de reactifs. II rendra des Services au personnel scientitique et au public qui visite les Musees dTIistoire naturelle, en permettant d'exposer au public n'importe quelle preparation microscopique en series nom- breuses avec n'importe quel objectif et n'importe quels grossissements meme les plus eleves. Les professeurs d'uuiversite ou d'autres etablissements scienti- fiques pourront preparer leurs cours entiers sur des disques et installer sur les memes les preparations necessaires a illustrer une ou plusieurs legons. Le travail des assistants et preparateurs sera reduit pendant le cours a une simple mise au point qui deviendra meme inutile quand les eleves connaitront le maniement des verniers. Les experimentateurs bacteriologistes, physiologistes , etc. pour- ront serier toutes leurs observations et les comparer instantanement. XXIII, 2. Lebrim: Application de la luethode des disques rotatifs. 173 Les medecins poiirront suivre snr un meine disque revoUition des raaladies niicrobiennes en seriant les couvre-objets qiii ont servi aux analyses bacteriologiques d'ime tuberculose, d'iine blennorrhagie, etc. A riieure oü les etiides heraatologiques acquierent une importance tous les joiirs grandissante, les disques seront des documcnts im- portants ([ui raconterout revolution d'ime maladie, d'ime vacciuatiou, riiistoire d'uiie experience. L'examen des cultiires sur plaque sera accelere et facilite, la numeration des colonies acquiera une plus grande precisiou. II rendra des Services nombreux a l'etude des objets difficiles ä distinguer les uns des autres en permettant un examen plus rapide et une comparaison imraediate. Un professeur d"embryologie pourra montrer sur un meme disque tous les organes d'un embryon. Les projections lumineuses d'objets microscopiques seront faciles et rapides , car l'operateur pourra inscrire a cote de chaque pre- paration Tindice des verniers et mettre a coup siir, l'objet a projeter dans le champ du microscope. Tout travailleur aura toujours sur son microscope un disque pret pour faire une serie de preparalions rapides, sans avoir comme maintenant la peine de nettoyer chaque fois un porte-objet. Cela mettra en un mot beaucoup plus d'ordre sur les tables des laboratoires. Gräce a la combinaison des deux mouvemeuts au meme moment, il sera possible de suivre toutes les sinuosites des objets incurves Sans que pour cela ceux-ci quittent le champ du microscoi)e. Avec les platines chariots actuelles qui n'avancent qu'a angle droit, cet examen continu des lignes courbes est tres difticile parce qu'il faut toujours avancer Tobjet dans un sens a la fois, puis dans l'autre a angle droit du premier, ce qui oblige l'operateur de se servir successivement d'une vis, plus de l'autre, sous peine de voir l'objet disparaitre du champ du microscope. Tous ceux qui rencontrcnt dans le cours de leurs etudes des objets tres longs k etaler, pourront les enrouler sur des disques. Exemple: les helminthologistes qui etudient les filaires, tenias, ascarides verront leurs recherches singuliereracnt facilitees et accelerees par l'emploi de la methode rotative. [Eingegangen am 2. April 1906.] 174 Glasenapp : Bedeutung d. Spitzertypie für d. Reproduktion. XXTIL 2. Die Bedeutung der Spitzertypie für die Rei)roduktioii von Mikropliotogra[)hien. Von Prof. 31. (wlaseiiapp in Kiga. Hierzu aclit Abbildungen. Nimmt man ein beliebiges Bnch mit Abbildungen von Mikro- photographien zur Hand und betrachtet letztere mittels einer schwach vergr()ßernden Lupe , so erkennt man in der großen Mehrzahl der 1. Holzquerschnitt. Autotypie -Reproduktion. Fälle, ilaß diese Abbildungen nach dem A uto typ i c -Verfahren hergestellt worden sind. Ihre weit verbreitete Anwendung verdankt diese Art der Reproduktion ihrer Wohlfeilheit und Anpassungsfähig- keit, da sie Druckformen liefert, welche sich mit den Lettern des Textes zugleich und in den Text hineindrucken lassen und ihrer Dauerhaftigkeit wegen eine hohe Zalil von Drucken gestatten. Charak- teristisch für die Autotypie-Reproduktion ist der sogenannte „Raster", XXIII, 2. Glasenapp: Bedeutung d. Spitzertypie für d. Reproduktion. 175 ein Gitternetz, in welches das Bild sich auflöst, sobald man es bei schwacher Vergrößerung betrachtet. Dieser Raster hat sich bisher zur Hervorbringung der Ilalbtöne des Originals als schwer entbehrlich erwiesen, und wo die Reproduktion, wie dies gewöhnlich der Fall, mit unbewaffnetem Auge betrachtet wird, erfüllt er seinen Zweck recht gut und ermöglicht durch die fein abgestufte Skala verschiedener Helligkeiten die beabsichtigte künstlerische oder ästhe- tisch befriedigende Wirkung des Bildes. Für die Wiedergabe von in den Text gedruckten mikrophoto- graphischen Abbildungen kann das Autotypieverfahren nur die Be- deutung eines Notbehelfes beanspruchen, da hier seine Leistungen nur selir unvollkommene sind, in einzelnen Fällen sogar vollständig versagen. Es liegt dies daran, daß durch die Maschen und Punkte des Rasters die scharfen Begrenzungslinien der Konturen des Originals Holzquerschnitt. Spitzertypie -Reproduktion. sägenartig ausgezackt erscheinen und zarte Linien durch das Zer- reißen im Punkte undeutlich werden oder ganz verschwinden. So- lange man die Reproduktion nur mit bloßem Auge betrachtet, kann man sich mit ihr noch leidlich zufrieden geben. Wünscht man je- doch feinere Details der Zeichnung deutlicher zu sehen und wendet zu dem Zweck eine Lupe mit b- bis lOfacher Vergrößerung an, was bei dem mikrophotographischen Original auf dem Kopierpapier 176 Glasenapp: Bedeutung d. Spitzertypie für d. Reproduktion. XXTII, 2. noch durchaus zulässig" ist und nicht selten wertvolle Aufschlüsse gestattet, so legt man sie enttäuscht wieder aus der Hand : das über das ganze Bild gelagerte Gitternetz hat alle feinere Zeichnung zer- stört und dafür neue Konturen hineingebracht , die dem Original völlig fremd sind und bei dem Nichtkenner ganz unzutreffende Vor- stellungen über die Struktur des fraglichen Objektes hervorrufen können. In der No. 838 (Jahrg. XVII, No. 6) der populär-wissenschaft- lichen Zeitschrift „Prometheus" hat nun Herr Dr. Robert Defregger Partie aus der Autotypie-Reproduktion Abb. 1 (Holzzellen) in ftfaelier linearer Vergrößerung. ein von dem bekannten Münchener Maler Emanuel Spitzer erfundenes und nach ihm als Spitzertypie benanntes Reproduktionsverfahren beschrieben , welches die gerügten Mängel des Autotypieverfahrens in dessen Anwendung auf die Wiedergabe mikrophotographischer Abbildungen nicht besitzt. Auf die Technik dieses neuen Verfahrens kann hier nicht eingegangen werden ; nur soviel sei bemerkt , daß Spitzer das Problem in verblüffend einfacher Weise löst, indem er bei der Herstellung der Druckplatte nach dem Autotypieverfahren den für die Erzeugung eines druckfähigen Klischees bisher für un- XXIII, 2. Glasenapp : Bedeutung d. Spitzertypie für d. Reproduktion. 177 entbehrlich gehaltenen Easter ganz wegläßt. Dadurch wird bei dem Kopieren auf der präparierten Metallplatte die Zeichnung des Originals nicht unterbrochen und die Struktur des letzteren in dem Maß voll- kommener und naturgetreu wiedergegeben , daß die Reproduktion nach dem Spitzerklischee eine stärkere Vergrößerung mit der Lupe sehr gut verträgt. Zu dieser AVirkung des SpiTZEiiSchen Klischees trägt wesentlich dessen Eigenschaft bei, daß seine Druckpünktchen (Farbenträger) nicht durchaus in einer Ebene , wie bei den Auto- Dieselbe Partie, wie Abb. 3, hergestellt aus der Spitzertypie- Reproduktion Abb. 2 in Ofacher linearer Vergrößerung. typien , sondern (nacli Dr. Defregger) in den hellen Stellen etwas tiefer liegen, und zwar um so tiefer, je heller der Ton der Zeichnung. Dadurch erhalten sie von der Walze weniger Farbe und sind in der Presse einem geringeren Druck ausgesetzt. Unter den die Spitzertypie charakterisierenden , verschiedenen Abbildungen des Defregger sehen Artikels befinden sich deren zwei, welche ein und dasselbe Objekt — einen Horizontalschnitt durch krankes Holz nach einem niikrophotographischen Original — dar- stellen und die als Abbildung 1 n. 2 in die vorstehende Mitteilung Zeitsclir. f. wiss. Mikroskopie. XXIII, 2. 12 178 Glasenapp: Bedeutung' d. Spitzertypie für d. Reproduktion. XXIII, 2. aufgenommen worden sind. Die Abbildung 1 ist mittels eines Auto- typiekliscliees, Abbildung 2 mittels eines Spitzertypieklischees her- gestellt. Durch Betrachten mittels einer Lupe läßt sich das vorhin Gesagte leicht bestätigen. Um den Unterschied in dem Charakter der beiden Bilder noch besser zu veranschaulichen, wurden von einer und derselben kleinen Partie (um die kleine Öttnung rechts unten im Zellgewebe des Holzes) Mikrophotographien in Ofacher linearer Vergrößerung und nach diesen die Klischees zu den Ab- P 1 '^Ä '^^ ■ ® ^^ft' '.■•:■■,-.■..''. ' .r' \ ' Glasursplitter vom Hartporzellan. Vergr. 215. Autotypie. bildungen 3 und 4 nach dem .Spitzertypieverfahren hergestellt. Wäh- rend nun die Abbildung 4, ein vergrößertes Teilbild der Si)itzertypie- reproduktion 2, die charakteristische Zeichnung des Querschnittes der Holzgefäße noch recht gut wiedergibt, erscheint die Zellenstruktur in dem der Abbildung 1 entsprechenden vergrößerten Teilbilde 3 durch den Raster dermaßen verändert und entstellt, daß es kaum miiglich sein dürfte, zu erraten, was die Zeichnung vorstellen soll. Dabei kommt noch in Betracht, daß die Spitzertypie diesem Bilde nichts hinzugefügt hat, dasselbe vielmehr das Original sehr getreu wiedergibt. XXIII, 2. Glasenapp: Bedeutung d. Spitzertypie für d. Rt-pruiluktion. 179 Um die Leistungen der beiden Reproduktionsverfalireii in beziig auf Mikrophotographie einer weiteren vergleichenden Prüfung unter- ziehen zu können, habe ich zu einigen Original-Mikropliotographien Klischees anfertigen lassen. Die von diesen gelieferten Abdrucke haben ausnahmslos die Überlegenheit der Spitzertypie gegenüber der Autotypie dargetan. Als Beispiele dafür mögen die Abltilduiigon 5 und 6 , sowie 7 und 8 dienen , von denen 5 und 7 Autotypie- und 6 und 8 Spitzertypie -Reproduktionen derselben Originale darstellen. 6. Glasursplitter vom Hartporzellan. Vergr. 21.5. Spitzertypie. In dem Splitter der Porzellanglasur sind die von den Kaolinpar- tikelchen in die amorphe Glasmasse auslaufenden nadeiförmigen Kri- ställchen (Belonite) jedenfalls von der Spitzertypie wesentlich deut- licher wiedergegeben als von der Autotypie. An anschaulichsten tritt jedoch die Überlegenheit der Spitzertypie über die Autotypie in bezug auf die richtige Wiedergabe der Details bei den beiden Diatomeenbildern 7 und 8 hervor. Bei oberfläch- licher Betrachtung sind die beiden Bilder freilich nicht sonderlich voneinander verschieden. Wendet man aber die Lupe an, so kommt 12* 180 Glasenapp : Bedeutung d. Spitzertypie für d. Reproduktion. XXIII, 2. man bald zur Überzeugung, daß die Autotypie überhaupt nicht im- stande ist , die überaus feine Struktur der Diatomeen auch nur an- nähernd richtig wiederzugeben, weil der Raster sie vollständig ver- nichtet. Man vergleiche nur das korbgeflechtartige Ineinandergreifen der Querrippen an der linken Mittelrippe , von dem das Autotypie- bild 7 kaum Andeutungen aufweist, während die Spitzertypie 8 dasselbe sehr schön erkennen läßt. Alle Linien und Konturen der letzteren sind scharf, in der Autotypie durch das aufdringliche Gitter- 7. Diatomee. Vergr. 500. Autotypie. netz gestört und verdorben. Letzteres bringt außerdem noch eine Zeichnung in das Bild, die sich tatsächlich in ähnlicher Form (Gitter, Siebe) bei einigen Diatomeen findet, bei der vorstehenden dagegen fehlt, wodurch Irrtümer veranlaßt werden können. Vergleiclit man die Reproduktionen nach der Spitzertypie mit den mikrophotographischen Originalen, so findet man allerdings, daß die Wiedergabe der feinsten Details der Zeichnung noch keines- wegs eine völlig tadellose und vollkommene ist. So finden sich in dem Diatomeenbilde 8 von der überaus feinen , der Längsachse der Diatomee parallelen Streifnng zwischen den Querrippen bloß in dem XXIII, 2. Glasenapp: Bedeutung d. Spitzertypie für d. Reproduktion. 181 rechtsseitigen oberen Teil derselben einige Andeutungen, während sie auf dem Original fast in der ganzen Ausdehnung des Objektes, wenn auch mitunter etwas schwach , sichtbar ist. Aber man muß berücksichtigen , daß das Verfahren erst in aller jüngster Zeit auf- gefunden worden ist, und daß seine Leistungen durch Änderungen etwa der ÄtzHüssigkeiten oder der Metallplatte sich voraussichtlich noch werden vervollkommnen lassen. Jedenfalls bietet die Spitzer- typie in ihrer Anwendung auf die Reproduktion von Mikrophoto- 8. Diatomee. Vergr. 500. Spitzertypie. graphien der Autotypie gegenüber bereits gegenwärtig so viele Vor- züge, daß man in der Wahl des Keproduktionsverfahrens für diesen Zweck nicht mehr im Zweifel sein wird. Dem Mikroskopiker bietet das neue Verfahren den Vorteil, daß er bei etwa beabsichtigten Reproduktionen mikrophotographischer Originale diese in kleineren Vergrößerungen und in entsprechend größerer Ausdehnung des Präparates herstellen lassen kann, was mitunter erwünscht ist. Für das Sichtbarmachen der feinen Details der Reproduktion kann dann die Lupe mit gutem Erfolge zu Hilfe genommen werden. 182 Tobler: Über die Brauchbarkeit von Mangins Rutheniumrot. XXIII, 2. Schließlich mag noch bemerkt sein, daß das neue Verfahren von der Spitzer typie -G esells chaft München G. m. b. H., München, Kaulbaclistr. 51a, erworben worden ist. [Eingegangen am 2G. April 190G.] [Aus dem Botanischen Institut der kgl. Universität Münster i. W.] Über die Brauchbarkeit von Mangins Eutheniumrot als Keagens für Fektinstoffe. Von Dr. F. Tobler, Privatdozent in Münster (Westf.l. Mangin' wies 1893 auf das Rutheniumrot (ammoniakalisches Kutlieniumsesquichlorid) als auf ein vorzügliclies Mittel zur Färbung der l'ektinstoffe hin. Dementsprechend empfahl es Strasburger im „Botanischen Praktikum" seit der dritten Auflage. - Der F'arbstoff färbt Cellulose gar nicht, stickstoffhaltige Körper schwächer als Pektinstoffe und ist infolge seiner Unlöslichkeit in Alkohol, Glyzerin und Nelkenöl für Dauerpräparate geeignet. Als besonders beachtenswerte Eigenschaft aber wird hervorgehoben, daß das Rutheniumrot alle von Pektinstoffen herstammenden Gummiarten und Schleime färbt, nicht aber die von Cellulose herzuleitenden. Diese Charaktere schienen dem Farbstoff geradezu den Wert eines Reagens spezifischer Art oder eines Indikators für Pektinverbindungen zu verleihen.^ Der Besitz eines solchen wäre bei den mangelhaften ') Mangin, L. , Sur l'emploi du roiige de ruthenium en anatomie vegetale (Compt. Rend. de l'Acad. des Sc. de Paris t. CXVI, 1893, p. 054). '-) Strasburger, E., Botanisches Praktikum. 3. Autl. , 1897 , p. 136 ; 4. AuH., 1902, p. 148. ^) So z. B. Koch, A., Referat von Mangin (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. X, 1893, p. 127): „Das beste Reagens für die mit Cellulose verbundenen l'ektinstoffe und das einzige für die Umwandlungsiirodukte der letzteren, die meisten Gummiarten und Schleime." Älinlicli Czapek, Biochemie Bd. I, 1905, p. 551. XXIII, 2. Tobler: Über die Brauchbarkeit von Mangins Rutheniuiurot. 183 Kenntnissen über die Natur der rektinverbindungen gewiß nicht zu unterschätzen. Fest steht ja nur, wie die einschlägigen Literatur- zusamnienfassungen ergeben,-^ daß diese Stoffe Kohlehydrate sind, in deren Molekül neben l'entosen und Hexosen andere Gruppen, viel- leicht zum Teil Glykonsäuren, eingetreten sind, l'brigens entstehen sie nach Ansicht Pfeffers keineswegs immer durch eine Metamor- phose der Zellwand. Indessen ist von vornherein ein gewisses Mißtrauen gegen ledig- lich mikrochemische Identifizierung einer Stoffgruppe sehr wohl am Platze. So äußert sich Pfeffer" dahin, daß die Pektinstoffe sich „ohne eine zureichende makrochemische Kenntnis natürlich nicht mikro- chemiscli präzisieren" lassen. „Es muß also dahingestellt bleiben, ob alles, was Mangix als Pektinstoffe anspricht, real zu diesen ge- hört." Und ähnlich weist Czapek'^ auf die „Lückenhaftigkeit des mikrochemischen Nachweises durch Mangin" hin. Nun kommt aber dazu, daß auch die mikrochemische Reaktion, die die Pektinstoffe bei Verwendung von Kutheniumrot bieten sollen, keineswegs eine überall hinreichend sichere zu sein scheint. Was die Färbung des Plasmas und anderer stickstoffhaltiger Zellbestandteile angeht, so ist sie wohl meist schwach genug, um im Vergleich mit der intensiveren etwa vorhandener schleimartiger Pektin- derivate erkannt und richtig gedeutet zu werden und nicht etwa als Pektinstoffreaktion zu erscheinen. Dagegen führt auch z. B. Stras- burger* an, daß vom Rutheniumrot in manchen Fällen auch cutini- sierte Membranen , nicht aber die Cuticula selbst , gefärbt werden. Da wären also schon Täuschungen möglich. -Mir selbst sind nun bei mykologischen Untersuchungen über die Sporenbildung und -membran gelegentlich Fälle bekannt geworden, wo sich gleichfalls Vorsicht angezeigt erwies, wollte man auf Grund der Rutheniumfärbung sich einen Schluß auf die stoffliche Natur gewisser Teile des Objektes gestatten. Was die Natur der Pilzmembranen angeht , so erwähnt Stras- burger, '* daß z. B. bei Mucorineen neben Cellulose Pektinstoffe vor- kommen , diese dagegen andern Gruppen , so z. B. Uredineen und ^) Czapek, a. a. 0. Pfeffer, W., Ptianzenphysiologie, 2. Auti., lid. I, 1901, p. 476. -) Pfeffer, a. a. 0., p. 481. ^) Czapek, a. a. 0., p. 513. ^) Strasburger, a. a. 0., 3. Aufl , p. 13(). ^) ÖtrasburgePv, a. a. U., S. Aufl., p. o3ü. 184 Tobler: Über die Brauchbarkeit von Mangins Rutheniumrot; XXIII, 2. Ustihigineen, gänzlich fehlen; die Ascomj'ceten besitzen vornehmlich Callose , die ßasidiomyceten große Verschiedenheiten im Verhalten der Membranen.^ Mir lagen in dem Falle, von dem meine kritische Betrachtung der Kutheniumreaktion ausging, Flechtensporen vor, die außerhalb des Ascus sich durch gallertige Verquellung der äußersten Membranparüe auszeichneten. Ich hielt es zunächst für möglich, daß hier Pektinstoffe vorkämen und wandte die Fiutheniumrotfärbung an. An den reifen ejakulierten Sporen ergab sie nur Färbung des Sporeninhaltes, indessen versuchte ich die gleiche „Reaktion" an un- reifen Sporen und erhielt hier ein unerwartetes Resultat. Die noch im Ascus enthaltenen unreifen Sporen lagen eingebettet in sehr stark gefärbte Massen , auch an herausgedrückten war die äußerste Peri- pherie oft intensiv gefärbt. Es zeigte sich danach , daß die letzte Erscheinung keine Besonderlieit der unentwickelten Sporenwände, sondern gleichfalls nur Färbung der Inhaltsreste des Ascus war. Deren Aufnahmefähigkeit für Rutheniumrot ging aber weit über die sonstiger plasmatischer Massen heraus. Nun wird vom Epiplasma der Ascomyceten von Ehkeka' be- richtet, daß sich darin eine Substanz tindet, die mit Jod wie Glykogen reagiert (rotbraun, bei ICrwärmen erblassend, in der Kälte wieder- kehrend). Diese Angabe wurde nun durch die Beobachtungen an dem Verhalten sicher als Glykogen bekannter Mengen geprüft. Setzt man zu in Wasser liegenden Partikelchen reinen Gly- kogens (Präparat von Tu. Schuchakdt- Görlitz) vom Rande des Deckglases her die wässerige Rutheniumrotlösung zu, so färben sich kleine Teilchen sofort durch, größere am Rande intensiv, noch ehe die Flüssigkeit im Gesichtsfeld gerötet erscheint. Zum Vergleich wurden dünne Schnitte von Sklerotien des Co- prinus stercorarius Bull, untersucht, in denen bekanntlicli reichlich Glykogen gespeichert ist. Die Schnitte zeigten auch die übliche Reaktion mit Jodjodkali vollkommen deutlich; ebenso aber sofort mit Ruthenium rot die intensive Tinktion des Inhaltes. Ferner untersuchte ich auf Schnitten die Apothecien von Peziza aurantia Oeder. Mit Jodjodkali erwiesen sich als glykogenhaltig: ^) Zum Teil auf Grund mikrochemischer Untersuchungen Mangins (Journ. de Bot. t. XIll, 1899, p. 209), auch kritisiert bei Czapek, a. a. 0., p. 513. Färbung des Schleims von Ascomyceten mit Rutheniumrot er- wähnt Strasbukger a. a. 0., 4. Aufl., p. 148. ■-) Erreüa, L , L'epiplasme des Ascomycetes. Bruxelles 1882. (Zitiert nacli Czapek, a. a. 0.) XXIII, 2. Tob 1er: Über die Brauchbarkeit von Mangins Rutheniumrot. 185 am stärksten der Inhalt des Gewebes am Fuße der Asci, weiter der Inhalt des Hymeniums überhaupt und die Sporen. Aber diese Par- tien ergaben auch Färbung mit liutheniumrotlösung-. Diese tritt an der Basis der Asci im Inhalt des Hymeniums, sowie an den Sporen am schnellsten auf, später (bei andauernder Einwirkung) färben sich auch die übrigen Teile des Hymeniums, wenngleich schwächer, deut- lich aber außerdem die A s c u s w ä n d e , so daß nun die Sporen sich viel weniger herausheben. Ich würde in denselben Felder verfallen, den ich an der kritik- losen Verwendung der Ftcaktion der Pektinstoffe mit Kutheniumrot aufdecken will , wollte ich hierauf hin die bezeichneten Fälle der liutheniumfärbung alle als Glykogenreaktion in Anspruch nehmen. Doch ist das Übereinstimmen von zwei Reaktionen immerhin schwer- wiegend ; in jenen Fällen also über die stotf liehe Natur der betreft'en- den Substanzen wohl das Urteil zu fällen erlaubt, zumal gegen die Verwertung der Jodreaktion für Glykogen, als einer Ideutitätsreaktion, noch kein Zweifel laut wurde. Wo sich, wie in dem letzten Falle, mit Hilfe von Rutheniumrot auch neue Teile des Bildes färben, bleibt noch Raum für eine Deutung auf Pektinstofte. Die dadurch ein- tretende Verdeckung der intensiven Inhaltsfärbung der Sporen (Gly- kogen?) mahnt zur Vorsicht bei solchen Beobachtungen. Des weiteren glaubte ich nun Flechtenmembranen zu kennen, die lebhafte Färbung mit Rutheniumrot zeigen. Ein Vorkommen von Pektinstotfen darin wird aber von Strasburger ^ nicht als bekannt angegeben. Hier würde nun vielleicht das Faktum aufklären, daß Isolichenin lebhafte Färbung mit dem genannten Farbstoflf zeigt. - Partikelchen von reinem Isolichenin (ich benutzte ein im Labo- ratorium von Professor Zopf 1900 hergestelltes Präparat aus Cetraria islandica) ergaben lebhafteste Tinktion. Zum Vergleich wurden dünne Schnitte durch den Thallus von Cetraria islandica zunächst mit Jodjodkali untersucht. Sie zeigten die typische Isolicheninreaktion (Blaufärbung) am intensivsten und zuerst in einer der Oberfläche parallel sich erstreckenden und ihr nahe gelegenen Zone. Dort wurde zuerst der Inhalt der Zellen blau. Später reagierten aber auch die Zellwäude des ganzen Thallus mit Ausnahme der in der Mitte gelegenen Gonidienschicht und der alleräußersten. (Vielleicht ist das nur eine Folge der Auflösung des Isolicheuins ?) *) Strasburger, a. a. 0., 3. Aufl., p. 336. 186 Tobler: Über die Brauchbarkeit von Mangins Rutheniuiui-üt. XXIII, 2. Gleiche Schnitte wurden in R u t li e n i u ni r o t lösung gebracht. Für den ersten Moment des Einwirkens der vom Rande her zu- gegebenen Farblösung ist das Bild ein der obigen Reaktion ent- sprechendes, d. h. die vorhin blau gefärbte Zone, nahe der Oberfläche, erscheint jetzt rot. Diese Färbung erweist sich bei mittlerer Ver- größerung als vom Zellinhalt herrührend. Ähnlich und allmählich stärker tingieren sich sodann auch Hyphen und Inhalt der Gonidien- schicht und zuletzt auch die Wände der Hyphen in der Rindenschicht, diese aber intensiver in Nähe der Gonidienschicht und nur bei starkem Farbstotfzusatz. Somit ersclieint hier schließlich der ganze Schnitt stark gefärbt, am lebhaftesten zuletzt die Gonidienschicht, fast gar nicht dagegen die alleräußersten Partien des Thallus. Diese Daten könnten zum Teil auf das Vorhandensein von Pektinstoften hin- zudeuten scheinen, wenn nicht die L()slichkeit des Isolichenins in Wasser , die naturgemäß allmählich eine mehr oder weniger aus- gedehnte Färbung des gesamten Schnittes nach sicli ziehen muß, zur größten Vorsicht in der Auslegung veranlassen müßte. Die beschriebenen Fälle ^ deuten zur Genüge an, daß die Ver- wertung des Rutheniumrots als Reagens für Pektinstotfe eine keines- wegs einwandsfreie ist. Es gibt genug Möglichkeiten, wo neben Pektinstotfen oder ihren Schleimen auch Körper anderer Natur und gleichen Verhaltens gegen den Farbstotf zu erwarten wären. Wo es sich nur um den Nachweis von Pektinstoften neben Cellulose , Callose u. a. handelt, da mag das Rutheniurarot seine Brauchbarkeit haben , vor allem auch für Dauerfärbung besitzt es unleugbare Vorteile , als ein Reagens aber läßt es sich nach obigen Beispielen noch weniger als früher betrachten. 1) Negative Resultate ergaben Versuche mit Rutheniumrot bei Stärke und Dextran (z. B. Gallerte von Streptococcus mesenterioides). [Eingegangen am 2G. Mai 190(5.] XXIII, 2. Huber: Method of preparlng large Numbers of Sections. 1^7 On a rapid Methocl of preparing large Nuinbers of Sections. By Prof. G. Carl Huber, Univeisity of Michigan. Ann Aibor, Mich. Witli two wood-cuts. Tlie preparation of sections used in the teaching of large laboratory classes in liistology and embryology forms, so far as the consumption of time is concerned , an ever increasing i)art of tlie necessary work of the staff of such hiboratories. Any method, therefore, that will lessen the number of necessary nianipulations of the several staining procednres in general use , without invalidating the results desired, it would seem, deserves consideration. The mere cutting of large numbers of sections is very time consuming. The introduction of paraftin embedding and the consequent development of serial sectioniug, especially with modern perfected automatic micro- tomes has minimized the time element in section cutting, but has necessitated the development of various methods by meaus of which paraffin sections may be fixed to slides or coverglasses in order that they may be mauipulated without injury during the processes of staining and mouuting. Certain of these methods are eminently satisfactory in the preparation of embryological series and of serial sections of tissues or organs destined for special study, but are very time con- suming when used for the preparation of large numbers of Single sections as is necessary for class work. The difticulties met with in staining paraffin sections have in part been obviated by staining tissues e n m a s s before embedding and sectioning in paraffin. Mass staining has, however, a limited application and as a general rule is unsatisfactory. For these reasons ccUoidin sections are still largely used in the preparation of class matcrial, necessitating a repeated manipulatiou of each section during the staining and Clearing of the sections and a consumption of much time while cutting the sections. 188 Huber: Method of preparing large Numbers of Sections. XXIII, 2. A satisfactory and simple raetliod for manipiilating larg-e numbers of paraftin sections, — paraflin embedding and sectioning requiring less time and giving on the whole far better results for tlie majority of tissues and organs than celloidin embedding — would therefore seem desirable. Several metliods have been devised to obviate the necessity of re- peated handling of single sections while staining large numbers of sections. Weigert (1) suggested a method, especiall}' recommended for the prepara- tion of serial sections of the central nervous System to be stained after his luyelin stain, which is however equally apphcable to celloidin sections of any tissue, in the execution of which the celloidin sections are arranged as desired on glass plates which have been coated with a thin layer of celloidin which has been allowed to dry and are then covered by another thin layer of celloidin. The sections are thus embedded in a thin sheet of celloidin, which with all the contained sections may be manipulated as a Single section during the staining procedure. Obregia (2) modified this method so as to make it applicable both for celloidin and paraffin sections, The procedure recommended by liim consists in coating glass-plates with a thin layer of sugar-dextrin Solution. These plates are then placed for a time in a warm oven. The celloidin sections are then arranged on such a plate as recommended by Weigert and are covered by a thin Solution of photoxj'lin in equal parts of alcohol and ether. The excess of this Solution is allowed to drain off, after which the thin layer of photoxylin on the evaporation of the ether and alcohol forms a thin sheet. On now placing the plate into water the photoxylin sheet becomes loosened, the sections adhering thereto. Obregia calls especial attention to the fact that this method is also applicable to paraftin sections. The method as recommended is in the main as follows. The paraffin sections are arranged on the dried sugar-dextrin coating of the glass-plate and slightly pressed against the plate with a brush. The plate is then placed in the warm Oven (57 <^ to GO**) for ten minutes, in which on the softening of the paraffin the sections flatten out. The parafßn is removed with filter paper and then xylol and this with absolute alcohol and the plate with the adherent sections covered by a thin layer of the photoxylin Solution. After drying, the plate is placed into water in which the photoxylin sheet with the adherent sections separates. Gulland (3) has modified, though immaterially, the method suggested by Obregia so far as pertains to the plating of paraffin sections , and recommends strongly its use in the preparation ot class material. In order to save time, he recommends that several pieces of tissue be embedded in one paraffin block and cut on the "rocking microtome". The sugar-dextrin Solution used is that recommended by Obregia. Plates of a desired size are covered on one side with a thin layer of this Solution and allowed to rest horizontally for two or three days to enable the sugar-dextrin Solution to dry. On such a plate the ribbons of paraffin sections are arranged and placed for a few minutes in a warm-oven with a temperature slightly above that of the melting point of the p:ir;iffin used. Tlie melted paraffin is removed with nnplitha and XXIII, 2. Hub er: Methocl of preparing large Numbers of Sections. 189 tliis is displaced with alcohol. The sections arc then covered with a thin Solution of celloidin, its solvent allovved to evaporate and the plate placcd into water in wliich the sheet of celloidin Avith the adherent sectit»ns becomes loosened. By means of this Obregia-Gulland raethod, a desired nnmber of paraftin sections are converted into celloidin sections, the cel- loidin (or photoxylin) being in the form of a Single sheet which may readily be manipulated in the various steps of staining, dehj'dration and Clearing. Strasser (4) has moditied the original Weigert (1) method in another direction , suggesting the use of paper Strips coated with gum Arabic foUowed by a coating with collodiuiu , and to inake such strips adhesive for paraffin sections a further coating with coUodiura (2 parts) and clove oil (1 parti. The paraffin sections, which need to be free frora folds (and to obtain such Strasser suggests the use of a section-stretcher) are ar- ranged on these prepared strips of paper and are then covered with a layer of the collodiuiu -clove oil Solution. Strasser (.5 — 6) has further inodified and as he states, siiuplified Ins method, and calls special attention to the ease with which paraffin sections thus fixed to strips may be stored for a long time ready for future use. For the details of Strasser's method, his especially constructed microtome and section-stretcher, the reader is referred to the original publications. A further method, based on a ditferent principle tlian the methods above enumerated, for staining large numbers of paraffin sections , with the possibility of obtaining Single sections has quite recently been recommended by Heidenhain (7). The method of procedure suggested is essentially the same as that used for fixing sec- tions to slides with the water-albumen method, except that thin mica-plates (Glimmerplatten) of the required size are used. The mica-plates are to be thoroughly cleaned, but without causing breaks or cracks. The plates are then covered with a layer of water and albumen fixative or a Solution of serum albumen. The ribbons of paraffin sections are arrangcd on such plates and placed on a warming table modified from that described by Born in Order to fiatten out the sections. As soon as this is accom- plished the excess of water is allowed to drain oflf and the mica-plate with the adherent sections placed in a warm oven with a temperature of 33*' to 35°. After the evaporation of the water the paraffin is removed in the usual way and the sections are stained as desired. The mica-plates are cut up as desired after staining and Clearing the sections. This method has not as yet been tried in this laboratory , but would on a priori grounds seem open to certain objections, as perfectly -clear mica-plates of any size are not readily obtained and only such would, it would seem, meet the requirements. All the other methods mentioned possess certain disadvantages as may be attested by the fact that they liave not met with general acceptance. With the Obregia-Gulland method, the paraffin sections if at all folded are often difficult to flatten out and the Strasser methotl is not easy of raanipulation and requires special apparatus for its most successful Operation. For this reason , we have been in this labo- ratory for some time engaged in modifying raore particularly the Obregia- GuLLAND method with an endeavor to make it more generally satisfactory and easy of manipulation so as to rid it of certain of its objectionable 190 Hub er: Method of preparing large Nurabers of Sections. XXIII, 2. features. This I believe has been accoraplished by combining the warm- water method of flattening paraffin sections with the Obregia-Gulland method. This procedure is simple and gives satisfactory results. It is here described in detail with the hope that it may prove useful in other laboratories. Embedding and Seetion Cutting. It is possible to ciit serially on an aiitomatic microtome uearly all tissues and Organs after em- bedding in paraffin, — decaleified bone and tooth, tendon, fascia, penis and central nervons System when desired for the Weigert myelin stain (?) may be mentioned as exceptions, Necessary is, however, a thorongh dehydration of the tissue-blocks to be embedded and cut, which is readily obtained by renewing several times the absolute alcohol used for dehydration and further a complete dis- placement of the alcohol by xylol followed by a thorough penneation of the tissue-blocks with paraffin. In accomplishing the latter step we have found very useful the method suggested by Kolster (8), namely permeating the tissues with paraffiii in partial vacuum. The method of procedure used here in this laboratory for embedding of tissues in paraffin is as foUows : The tissue-blocks , after thorough dehydration and permeation with xylol, are placed for a few hours in a mixture of equal parts of xylol and soft paraffin (melting point 45^), are then transferred for several hours into soft paraffin and for another few hours in liard paraffin (raelting point about 52*^). Before embedding in the paraffin , the bottle used as Container is fitted with a rubber cork through which has been passed a short glass-tube the free end of which is connected by means of a thick walied rubber tube to a Chapman's suction pump, by means of which a })artial vacuum is readily obtained and maintained in the bottle containing the tissues to be embedded. Several devises may be used for keeping the paraffin melted during this step. The glass- bottle containing the tissues may be placed on a warming plate, heated from one end with a flame to a sufficient extent to keep the paraffin in the bottle melted. A little experience soon enables one to judge of the size of flame necessary to heat the paraffin to a little above its melting point. The bottle containing the tissues and paraffin may be placed in a water-bath partially filled with water and the water heated to two or three degrees above the melting point of the paraffin used , or the bottle may be placed in the paraffin-oven and the rubber tube connecting it with the Chapman's suction pump allowed to pass through the cover of the compartment XXIII, 2. Huber: Method of preparing large Numbers of Sections. 191 of the paraffin-oven. The tissue-blocks and the paraffin to be used for embedding are kept in i)artial vacnum for about an liour, the time de})ending' somewhat on their size and character. Experience has shown tliat pieces of tissue thus treated are better permeated by the parafrtn than when embedded after the methods generally in use, and further, and whai is of eqnal iniportance, the consistancy of the paraffin used for embedding- is greatly improved. Tlie pieces of tissue with the paraffin thus treated are poured into a Petri or Esmarch's dish coated on the inside witli a thin layer of glycerin, and the pieces of tissue arranged ou tlie bottoni of the dish. The paraffin is then caused to harden quickly by fioating the dish on cold water and immersing it as soon as the paraffin has congealed sufficiently to admit of this, After complete hardening the jiaraffin bk^ck thus obtained is cut into pieces as desired. Paraffin-blocks containing one or several pieces of tissue even to the size of 3 cm by 1'5 to 2 cm are then readily cut serially on an automatic Zimmer- mann microtome, Minot pattern (Leipzig), or better still on a Minot automatic rotary microtome (Bausch and Lome) if the tissues are well embedded and the i)araffin is of the right consistency, Mattening paraffin sections and fixing to plate. In flat- tening out the paraffin sections and fixing them to the glass-plate preparatory to removing the paraffin and Converting them to celloidin sections we have found the following procedure very useful. In Order to use conveniently the warm -water method of flattening pa- raffin sections, the a])paratus shown in fig. 1 was devised. As may be ascertained from this figure, this cousists of a rectangular tray, supported by three legs the height of one of which may be adjusted. This tray is constructed of copper , lined with tin and measures 18 cm by 12 cm with sides 3 cm high (size is arbitrary). To the bottom of the tray are fjistened three bridges about 1 cm high and it is provided witli an outflow, placed in one corner. A desired number of glass-phites, 16 cm by 10 cm form a part of the equip- ment. On using this apparatus, the tray is filled to a depth of about 2 cm with distilled water or with a water-dextrin Solution (see below). The distilled water used should be vigorously boiled and allowed to cool before using to prevent the formation of bubbles on using. The method may be combined with the Obregia-Gulland procedure in one of two ways. Obregia's sugar-dextrin Solution is prepared as follows : 192 Huber: Method of preparing large Nurabers of Sections. XXIII, 2. A Solution of equal parts of rock-candy and distilled water 300 cc A Solution of equal parts of dextrin and di- stilled water 100 „ Absolute alcohol 200 „ Mix the siigar and dextrin Solutions in mortar and while con- stantly stirring add slowly tlie absolute alcohol. Filter througli absorbant cotton ; this niay be liastened by attacliing the receiving bottle to a Chapman's suction pump. A desired mimber of glass-plates may be coated on one side with a thin layer of this Solution, and placed horizontally for several hours to enable the Solution to dry partially, when the plates are ready for further use. A simpler and more convenient method, however, is the following. — A sufficient amount of the sugar-dextrin is added to the distilled water of the tray to make of this a 3 ''/q to 5^/q sugar-dextrin Solution in which case it is not necessary to coat the plates with the sugar-dextrin Solution. A glass-plate coated with the sugar-dextrin Solution is placed in the water of the tray XXIII, 2. Huber: Method of preparing large Nurabers of Sections. 193 or, in case the tray contains the water -dextrin Solution above men- tioned , a glass-plate thoroughly cleaned is placed into this. The ribbons of paraffin sections are now cut to the necessary lengtli and transferred with needles or brush to the surface of the water or the water- dextrin Solution and arranged as desired. The water or the water -dextrin Solution is now heated by means of a flarae until it becomes sufficiently warmed to flatten out perfectly the paraffin sections. The flame is removed when this is accomplished. The fiattened ribbons are now arranged as close together as possible and a hot needle inserted at several places between the contiguous borders of the several ribbons. This melts the paraffin over a small area and on cooling leaves the ribbons united at points where the hot needle has been inserted. The water or the water -dextrin Solution may now be allowed to drain off through the outfiow, when the ribbons of flattened paraffin sections will settle on the glass-plate. With a little exercise of care, however, the glass-plate may, after the flattening of the sections, be lifted from one end and drawn from the water without in the least disturbing the sections nor their arrangement; especially is this true if the ribbons of paraffin have been joined together with a hot needle as above suggested. This procedure is now followed, as by this method the distilled water or the water- dextrin Solution may be used over and over again , it being only necessary to heat it a little from time to time to keep it sufficiently warmed to cause the sections to flatten out properly. After removing the plates from the water or water- dextrin Solution, the excess of water is drained off and they are set aside, being placed horizontally until the water evaporates. This may be accomplished at room tempe- rature or may be hastened by placing the plates in a warm-oven heated to about 35 "^ or 40". The plates are ready for the removal of the paraffin as soon as the water has had time to evaporate. Experience has shown that the 'S^Jq to ö'^Jq of the sugar- dextrin Solution used contains enough of the sugar and dextrin to prevent the sections from becoming too dry on evaporation of the water. To melt the paraffin it is convenient to place the glass-plate, section side up , on a warming plate heated from one end with a flame, the end of the plate nearest the flame being supported by a glass rod 8 mm to 10 mm in thickness ; this to equalize the temperature. As soon as the paraffin surrounding the sections is melted the plate is placed into xylol and is then trausferred to absolute alcohol. For Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXIII, 2. 13 194 Huber: Method of preparing laige Nurabers of 8ections. XXIII, 2. this piirpose rectangular glass trays , a little larger than tlie plates used are convenient, The glass-plate with the sections adliering to one side is now removed froiii tlie alcohol, placed on edge for a few moments and is tlien covered on the section side with a thin layer of the following photoxylin sointion : Photoxylin 10 g Absolute alcohol 100 cc Ether 500 „ The photoxylin may be dissolved in abont equal parts of alcohol and ether and the ether not used added when Solution has been obtained. Of this Solution a small quantity is poured on the section side of the plate after this is taken from the absolute alcohol. The plate is then slightly rocked so as to spread the photoxylin Solution as evenly as possible. The excess is then drained from one angle of the plate into the stock bottle of the photoxylin Solution. On the evaporation of the ether and alcohol the photoxylin forras a thin but streng film, to which, as will be seen, the sections adhere. As soon as the film of photoxylin has formed, which may readily be ascertained by inspection or by touching it with the finger , this is cut with a Sharp knife along the borders of the plate, about 5 mm from the edge , or by the cutter shown in fig. 2 , and the plate placed into distilled water, when the film of photoxylin with the adherent sections will loosen readily from the glass-plate. If a number of plates are to be manipulated at the same time , a plate may be carried to the alcohol , another to the xyjol and another placed on the warming plate and carried from one step to the other as rapidly as the manipulations can be carried on ; it being only necessary not to allow the sections to dry after the plate has been removed from the absolute alcohol, before coating the sections with the photoxylin Solution and also, not to allow the film of photoxylin to become too dry before placing the plate into distilled water. Such films of photoxylin, measuring about 15 cm in length and about 10 cm in width may readily be made to contain 50 to 75 sections of the size generally given out in regulär laboratory work. They may be stained after any of the methods generally used. Mention may be made of the hematoxylin- eosin method or hematoxylin and other of the acid anilin dyes used in connection with it; of hema- toxylin and VAN Giesen's picric acid and fuchsin stains and the manner of using this method as recommended by Weigert (9) has XXIII, 2. II üb er: Method of preparing large Numbers of Sections. 195 proven more satisfactory than the otlier metliods recommended ;. Heidenhain's iron - hematoxylin method and Weigert's differential elastic tissue stain and other staining metliods whicli need not be especially enumerated. In staining tlie films of sections the entire fihri is transferred from one fluid to the other by grasping the film with forceps by two corners. Tlie films of sections are, after staining, dehydrated in QQ^Iq alcohol and cleared in carbol-xylol. They are, however, not materially affected by a short stay in absolute alcohol and may then be transferred to xylol. For cutting up the films so that Single sections or small groups of sections may be given out to the individuals of a class it has been found expedient to make use of a small Instrument known as a paper-cutter and shown in fig. 2. This consists of a wheel made of well tempered steel measuring 5 cm in diameter with sharpened edge, revolving on an axis and fastened to a handle. In order to cut the photoxylin films, these are brought from the carbol-xylol or xylol used for Clearing onto a dry glass-plate. If necessary, the film is flattened out by brushing over it with a camel's hair brush moistened in carbol-xylol or xylol. The cutting wheel is then run between the rows of sections and the individual sections of the rows. When cut the sections are brushed into a small dish containing the Clearing fluid used. Scissors may be used for cutting the films as desired ; with the method here described the cutting may be , however , much more quickly ac- complished. Storing the films of sections. In cutting serial sections on an automatic rotary microtome of any given tissue or organ many more' sections than are necessary for immediate use may be made in a Short time. The entire series may in a comparatively short time be fastened to glass - plates, especially if the sugar-dextrin So- lution is added to the distilled water which is warmed to flatten the sections, as described, and the sections may be made to adhere to photoxylin films without the consumption of much time. Thus an entire series of sections of a given tissue or organ numbering several hundred may be cut and fixed to photoxylin films in several hours , many more sections than generally necessary for immediate use. It has been found convenient to störe for future use the photoxylin films not used in the following way ; after coating a plate with photoxylin and cutting along the edges as has been described, the plate is placed in distilled water and after a few moments is brushed over with a camel's hair brush, this to remove the small 13* 196 Hub er: Methocl of preparing' large Nurabcrs of Sections. XXIII, 2. bubbles Avhicli collect on the surface of the film. The tray is theu placed so that one of the narrow edges of the plate is toward the manipulator and the film is loosened for a short distauce from this edge and applied to a glass-tube a little longer tlian the width of the film, and aboiit 5 mm to 8 mm in diameter and if the loosened portion of the film has been evenly applied to sides of the glass- tube , the remainder of the film may be readily loosened from the glass-plate and roUed npon the tube as this is caused to rotate over film and plate. Before placiug the dried film into the distilled water , this may be marked as desired witli India ink , or a small Strip of thin })aper , bearing the uecessary information , written in India ink may be placed on the glass-plate and included in the film with the sections. The glass-rods with the photoxyliii films roUed on them may be stored in 80 ^/^ alcohol in large tube vials (18 cm high and 5 cm diameter). If it is desired to unroll a photoxylin film from a glass - tube , this is placed in distilled water when the film may be readily uurolled and stained as desired. To Mr. Clarence Snow , the assistant in the laboratory , who has used this method for some time in the preparation of the class material, I am indebted for the working out of many of the details of the method as now used an hcre described. References to Literature. 1) Weigert, Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. II, 1885, p. 490. 2) Obregia, Neurolog. Zentralbl. Jahrg. IX, 1890, p. 295. 3) GuLLAND, Journ. Path. and Bact. vol. I, 1893, p. 391. 4) Strasser, Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. III, 1886, p. 346. 5) Strasser, Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. IX, 1892, p. 1. 6) Strasser, Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XII, 1895, p. 154. 7) Heidexuaix, Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XXII, 1905, p. 330. 8) KüESTER, Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XVIII, 1901, p. 170. 9) Weigert, Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XXI, 1904, p. 1. [Eingegangen am 8. Juni 1906.] I I XXIII, 2. Freund: Apparat zur Massenfiirbung mikrosk. Präparate. 197 Neuei* Apparat zur Masseniiirbung mikroskopischer Pril])arate von F. Hellige & Co. Von Haiis Freund in Halle a. S. Die Firma F. Hellige & Co. in Freiburg (Breisgan) liefert einen neuen Kasten für die Massenfärbung histologischer Schnitte, der für den Tisch des Mikroskopikers praktisch sein dürfte , wenn es sich um gleichzeitige und gleichstarke Färbung einer größeren Anzahl von Schnitten handelt. Der Apparat besteht aus einem für die Auf- nahme der Farblösung bestimmten Glastrog und einem viereckigen Glasrahmen von der Länge eines englischen Objektträgers, der in den Trog hinein gestellt wird. Die Schmalseiten des Rahmens sind höher als die Längswände und derart mit Rippen versehen, daß 20 Objektträger Platz haben, wenn mau zwischen je zwei Rippen zwei Objektträger mit den Rücken aneinander legt. Die Objekt- träger ruhen auf einer nach iuuen vorspringenden Glasleiste am unteren Rande des Rahmens. Zur Färbung wird der Rahmen mit den Objekten in den mit Farbe gefüllten Ginstrog gestellt. Zur leichten und sicheren Übertragung des Rahmens aus einer Flüssig- keit in eine andere dienen Nickelindrahtheber. Oben an dem Gestell befinden sich Löcher, in die man mit den Drahtzangen eingreifen kann, ohne die Präparate zu alterieren. Diese leichte Übertragbar- keit aller Objekte zu gleicher Zeit zeichnet den Apparat vorteilhaft aus gegenüber den Hellendall sehen Trögen. Da Rahmen und Kasten aus Glas gemacht sind, so sind sie natürlich gegen Säuren und ätzende Reagentien resistent. Die Konstruktion als Rahmen bedingt, daß der Apparat weniger leicht zerbrechlich ist als frühere aus Glasstäben gefertigte Gestelle ähnlicher Art. Die Reagentien können sparsam verwendet werden, da der Trog nur so groß ist, daß der Rahmen gerade hineinpaßt. Bis jetzt hat die Firma nur solche Gestelle in den Handel gebracht, die Objektträger von 76 mm Länge und einer Breite bis zu 52 mm fassen, doch in Kürze sollen 198 Freund: Apparat zur Massenfärbung mikrosk. Präparate. XXIII, 2. auch Gestelle für Objektträger anderer Größen herauskommen. Der Preis des Apparates wird im Detailverkauf etwa je 1*40 oder l'öO M. für Glasrahmen und Glastrog betragen. — Die Firma teilt mit, daß sie nur an Wiederverkäufer verkauft, und daß die Apparate einzeln nur in Handlungen einschlägiger Artikel erhältlich sind. [Eingegangen am 31. Mai 190G.] XXIII, 2. Referate. 199 Eeferate. 1. Präparationsmethoden im allgemeinen. Tswett, M. , Zur Ultramikroskopie (Ber. d, d. botan. Ges. Bd. XXIV, 1906, p. 234). Verf. macht im Anschluß an das Interesse, welches allenthalben die neukonstruierten „Ultramikroskope" finden, auf die von ihm er- fundene Vorrichtung aufmerksam, die 1901 von ihm in der „Zeit- schrift für physikalische Chemie" beschrieben worden ist („Vorrichtung zur Beobachtung von Fluoreszenz- und Opaleszenzerscheinungen" a. a. 0. Bd. XXXVI, p. 450; ferner „Constitution physicochimique du grain de chlorophylle" in Trav. de la Soc. des Naturalistes de Kazan t. XXXV, p. 58). Bei Tswett s „Luminoskop" wird ein starker liichtkegel durch das in einem Dunkelkasten untergebrachte , mit der zu unter- suchenden Flüssigkeit gefüllte Probierröhrchen in axialer Richtung- geschickt , wobei die Lichttrajektorie durch einen . seitlichen Okular- tubus in senkrechter Richtung beobachtet wird. „Ist die Flüssigkeit fluoreszenzfähig oder sensu strictiori nicht optisch leer, so sieht man in dem Sehfelde einen leuchtenden Fluoreszenz- bezw. Opaleszenz- kegel. Ein in der Okularöffnung angebrachtes Polarisationsprisma erlaubt zwischen Fluoreszenz- und Opaleszenzlicht zu unterscheiden, denn letzteres , welches polarisiert ist , läßt sich durch Drehung des Prismas auslöschen." Tswett s Luminoskop gestattet nicht ultramikroskopische Teil- chen zu zählen oder direkt wahrzunehmen, sondern es läßt sich mit 200 Referate. XXIII, 2. seiner Hilfe mir im allgemeinen die Gegenwart solcher Teilchen feststellen. „Bei physiologisch-chemischen Untersuchungen, z. B. der Chlorophyllpigmente, wo man sich beständig über Reinheit oder Echt- heit der Lösungen oder über die etwaige spurweise Anwesenheit von fluoreszierenden Stoffen zu unterrichten hat, dürfte mein Apparat nicht zu entbehren sein." Küster {Halle a. S.). Bnink, A., Über die Acetonanwendung zur Paraffin- einbettung, besonders zu einer einfachen Schnelleinbettungsmethode (Münch. med. Wochenschr. Jahrg. LH, 1905, No. 52, p. 2525—2527). Verf. hat die Acetonmethode für die Schnelleinbettung zu ver- einfachen gesucht und empfiehlt die folgende Methode : Die möglichst kleinen Stücke kommen frisch in eine gut verschließbare Flasche mit reinem Aceton , auf deren Boden ausgeglühtes Kupfersulphat liegt. Sie bleiben hier je nach ihrer Größe und Struktur 20 bis 50 Minuten, bis man (wenn sich dieser Modus nicht etwa aus be- stimmten Gründen verbietet) bei leisem Drucke auf das Präparat zwischen den Fingerspitzen nicht mehr das Gefühl hat, daß das Stück im Inneren noch weicher ist als die oberflächlichen Partien. Dann kommen die Präparate in Xylol. Hierin erlangen sie in 5 bis 10 Minuten eine trübe Transparenz , die natürlich das ganze Ge- websstück durchsetzen muß , und können nun in Paraffin eingelegt und in 15 bis 20 Minuten auf den Block gebracht werden. Die ganze Prozedur dauert also bis zur Fertigstellung des Blockes 40 bis 80 Minuten. Die Paraffindurchtränkung nach der Aceton-Xylol- Behandlung ergibt so hervorragend schnittfähige Blöcke , besonders wenn man nichts zu überstürzen braucht, daß Verf. für alle Arten von Präparaten , die in Paraffin eingebettet werden sollten , das Aceton zur Entwässerung statt des Alkohols mit gutem Erfolge ver- wendet. Verf. empfiehlt überhaupt bei subtileren Arbeiten den Er- satz des Alkohols durch Aceton. Objekte , von denen man bei Alkoholhärtung nur schwer gute Paraffinschnitte erhält , geben hier bessere Resultate, z.B. sehr derbe Gewebe, wie Aortenwand, oder Präparate mit Geweben von sehr verschiedener Konsistenz, wie weiche Sarkome in Verbindung mit Knochen. Ein zweiter Vorzug liegt in der sclion oben erwähnten größeren Einfachheit der Anwendung des Acetons. Alkohol muß man gewöhnlich in aufsteigender Konzentra- tion gebrauchen, um starke Schrumpfungen zu vermeiden. Bei Aceton, auch wenn es sofort wasserfrei benutzt wird, bleibt die Schrumpfung XXIII, 2. Referate. 201 der Gewebe gering. Will man möglichst schonend vorgehen , so kann man das Aceton in verschiedenster Konzentration mit Wasser mischen ; es wird dies aber nur selten nötig sein. Endlich ist das Aceton dem Alkohol gegenüber billig. Der Acetonentwässerimg kann man alle üblichen Fixierungsmethoden vorhergehen lassen. Sehr empfehlenswert sind P^rmol, FLEMMiNOSche Lösung und Sublimat. Bei Formol bleiben nach der Entwässerung mit Aceton die Blut- körperchen vorzüglich erhalten und geben brillante Eosinfärbungen. FLEMMiNGSche Lösuug erfordert zunächst ein gründliches Auswaschen in fließendem Wasser. Nach der Sublimatfixierung mit einer der üblichen Lösungen empfiehlt es sich die Entfernung des Sublimats aus den Präparaten ebenfalls in Aceton vorzunehmen , dem man einige Jodkristalle zusetzt bis zur Koguakfarbe, und diesen Zusatz nach einigen Minuten erneuert, bis die Farbe nicht mehr aufgehellt wird oder verschwindet, dann kurze Entwässerung in reinem Aceton. Hat man zum Zwecke einer besseren Bakterienfärbung mit Alkohol fixiert , so wird man meist auch mit Alkohol entwässern ; indessen spricht auch nichts gegen die Anwendung von Aceton. Verf. hat aber auch den Alkohol zur Fixierung bakterienhaltiger Gewebe fast ganz verlassen und durch Aceton ersetzt : die Färbungsresultate waren ebensogut wie die der Alkoholfixierung. — Verf. hat eine Reihe von Versuchen darüber angestellt, ob es zweckmäßig ist, die zur Fixierung benutzten Substanzen (Formol , Osmiumsäure , Cbrom- säure, Sublimat) in Aceton zu lösen, hat aber weder eine Verbesse- rung noch eine Beschleunigung erzielt. Sublimat löst sich in Aceton bis zu über 100 Prozent, doch ergaben die starken Lösungen, wenig- stens" für pathologisch - anatomische Zwecke , keine Vorteile. Verf. empfiehlt eine Fixierung der Stücke in 7"5prozentiger Sublimat- Koch- salzlösung und dann Entwässerung in Aceton. Auch die Mischung oder Lösung von entkalkenden Substanzen in Aceton, z. B. von Tri- chloressigsäure hatte keinen Erfolg. Auch eine Fixierung und Ent- wässerung mit gleichzeitiger Färbung in Farbstofflösungen in Aceton ergab kein befriedigendes Resultat, doch setzt Verf. diese Versuche noch fort. Die Fixierung in Aceton erhält ganz brillant die Harn- säureinfarkte der Nieren. Will man solche Nieren als makroskopische Präparate aufheben, so geht das für einige Wochen in einigermaßen brauchbaren Farben in einem Gemische von Xylol und Aceton zu gleichen Teilen. Allmählich werden die Objekte zu durchsichtig. Zur Herstellung mikroskopischer Präparate von Harnsäureinfarkten fixiert und entwässert man in Aceton und bettet in Paraffin ein. 202 Referate. XXIII, 2. Die Schnitte dürfen nicht auf Wasser gelegt werden, sondern kommen am besten direkt in Xylol und werden mit einem alkoholischen Kern- färbemittel gefärbt. Schiefferdecker {Bonn). Sitseii, A. E. , Erfahrungen über Aceton-Par af fin-PMn- bettung (Zentralbl. f. allgem. Pathol. u. pathol. Anat. Bd. XVI, 1905, No. 19, p. 774—775). Vor einiger Zeit haben Henke und Zeller ^ eine neue Methode beschrieben, bei der das Aceton gleichzeitig verwendet wurde als Fixierungs- und Härtungsmittel und als Zwischensubstanz für die Durchtränkung mit Paraffin. Verf. hat über die Verwendbarkeit dieses Verfahrens Untersuchungen angestellt. Gleichgroße Stücke desselben Materials wurden auf drei verschiedene Weisen behandelt : 1) Aceton-Paraffin-E inb ettung. Es wurden für diagno- stische Zwecke gut verwendbare Präparate erhalten. Kerne nicht gut fixiert, Kernkörperchen nur zu einem kleinen Teile sichtbar. Schnitte mehr oder weniger trübe. Fett verschwunden , Glykogen noch mit Jod nachweisbar. Am besten noch, wenn ganz dünne Stückchen (1 bis 2 mm Dicke) 30 Minuten in Aceton blieben (bei 37*^) und dann eine gleich lange Zeit in Paraffin (bei 60°; der Schmelzpunkt der Paraffinraischung schwankte je nach der Luft- temperatur zwischen 50*^ und 55*^). Blieben die Objekte länger in Aceton, so trat eine stärkere Schrumpfung ein und das Objekt wurde so spröde , daß zusammenhängende Schnitte von 3 bis G /^ Dicke nur schwer zu erhalten waren. Die am meisten verwendeten Fär- bungen (Kernfärbungen, Weigeiits Fibrinreaktion und Weigerts Färbung für elastische Fasern, Tuberkelbazillenfärbung, GnAMSche Methode etc.) gelangen alle ziemlich gut. 2) Weit schöner waren die Präparate, wenn man der Aceton Wirkung eine Fixie- rung vorausgehen ließ (meist lOprozentige Formollösung). Die 1 bis 2 mm dicken Scheiben blieben darin wenigstens 15 bis 30 Mi- nuten und wurden dann für 30 Minuten in Aceton und ebenso lange in Paraffin gebracht. Eine etwas längere Einwirkung des Formols ist , vor allem bei parenchymatösen Organen , wegen der schönen Fixierung vorzuziehen, doch ist daran zu denken, daß ein mehr als 24stündiges Verweilen in Formol die Färbbarkeit zuweilen schädigt. Auch nach Objekten aus Müller scher Flüssigkeit gelang die Ein- bettung mit Aceton ohne vorherige Härtung in Alkohol. Man muß 1) Vgl. Zentriilbl. f. allgem. Pathol. u. pathol. Anat. Bd. XVI, 1905, p. 3. XXIII, 2. Referate. 203 die Scheibchen dazu 24 Stunden auswaschen. 3) Auch nach Här- tung in Alkohol gelang die Einbettung sehr gut. Man übertrage die Stücke für 30 Minuten direkt aus Alkohol von beliebiger Kon- zentration in Aceton und darauf für eine halbe Stunde in Paraffin. Für 2) und 3) ist zu bemerken, daß durch Osmiurasäure geschwärztes Fett wenigstens in der zur Einbettung notwendigen Zeit nicht gelöst wurde (so eine scharfe Marchi- Färbung; ebenso bei fettiger Dege- neration). Verf. kommt zu den folgenden Schlüssen: 1) Für diagno- stische Zwecke ist die Henke -Zeller sehe Aceton -Paraffin -Einbettung gut verwendbar. Man hüte sich nur vor einem zu langen Verweilen in Aceton und nehme nicht zu dicke Schnitte. 2) Um feine Struk- turen zu erhalten, ist die Methode so zu modifizieren, daß man der Einbettung eine Fixierung (am besten in Formol) vorausgehen läßt: besonders schön fixierte und leicht schneidbare Objekte. 3) In Chromsalzen fixierte Objekte wasche man vor der Acetoneinwirkung gründlich aus. 4) Bei schon gehärteten Präparaten kann das Aceton die sonstigen Einbettungsmittel ersetzen, und ist wegen der Einfach- heit seiner Anwendung vorziehbar. 5) Zum Nachweise von Glykogen verwende man die Henke -Zeller sehe Methode ohne vorherige Fixie- rung ; Fett dagegen kann man nur erhalten durch Schwärzung mittels Osmiumsäure. Schiefferdecker {Bonn). Fick, J. , Aufklebemethode oder Schälchenmethode bei der Färbung von Paraffinschnitten (Zentralbl. f. allgem. Pathol. u. pathol. Anat. Bd. XVI, 1905, No. 15, p. 596—599). Es ist jetzt im allgemeinen üblich geworden , Paraffinschnitte für die Weiterbehandlung auf dem Objektträger zu fixieren. Die ältere Methode , die Schnitte vom Messer aus in ein Schälchen mit Xylol zu übertragen, durch absoluten und 95prozentigen Alkohol in Wasser zu bringen und weiter zu behandeln wie Celloidinschnitte, scheint nur noch selten benutzt zu werden und doch sind die End- resultate bei beiden nicht die gleichen. Bei aufgeklebten Schnitten (die Methode des Aufklebens ist dabei gleichgültig) ändert sich das Verhalten der Gewebe manchen Farbstoften gegenüber : Bei Färbung mit Cochenillealaun behält das Bindegewebe einen deutlich roten Farbentou, der bei der entsprechenden Behandlung nach der Schälchen- methode nicht vorhanden ist. Weit auffallender ist der Unterschied bei der Färbung mit basischen Anilinfarben , und zwar ändert sich das Verhalten der Gewebe den Farbstoffen und der Differenzierung 204 Referate. XXIII, 2. mit Alkohol gegenüber bei der Auf klebemetliode in folgender Weise : Die Kerne der Epitbelzellen färben sich verhältnismäßig sclnvächer, das Protoplasma der Epitbelzellen nnd das Kollagen verhältnismäßig stärker, bezw. geben bei der Differenzierung die Farbe weniger leicht ab als bei der Schälchenmethode. Ähnliche Erscheinungen zeigten sich auch bei der letzteren Methode, wenn die Schnitte sehr dick waren, namentlich aber, wenn sie nicht gleichmäßig dick waren. Geringer und weniger störend sind die Unterschiede bei der Hämat- oxylin- Eosin -Färbung, bei der Färbung nach van Gieson, bei den Färbungen für elastische Fasern nach Weigert oder Unna -Tänzer. Verf. kommt daher zu dem Schlüsse, daß die Aufklebemethoden nur dann zu verwenden sind, wenn die Schälchenmethode nicht anwend- bar ist, also: 1) wenn man eine lückenlose Serie braucht; 2) wenn die Schnitte im Schälchen entweder schon im Xylol oder beim Über- tragen aus Xylol in Alkohol auseinander fallen. Das Ausfallen ein- zelner Teile der Schnitte ist durchaus nicht immer eine absolute Kontraindikation gegen die Schälchenmethode , da eventuell nur un- wichtige Teile ausfallen können ; 3) manche Färbungen, so die Fär- bung auf Tuberkelbazillen nach Ziehl - Neelsen , die Färbungen mit nachfolgender Jodierung verlangen aufgeklebte Schnitte, da die Schnitte im Schälchen unter Einwirkung der stark schrumpfend wirkenden Bestandteile der Farben und Reagentien sich zu unentwirrbaren Klumpen zusammenballen. Dagegen soll die Schälchenmethode an- gewendet werden bei Untersuchungen , die auf feinere Zellstudien hinauslaufen, wenigstens sollten immer Kontrollpräparate nach dieser Methode angefertigt werden. Schiefferdccler (Bomi). Homblirger , A. , Über die Gründe der mangelhaften Haltbarkeit und die Wiederherstellung ab- geblaßter W e k; E R T s c h e r N e u r o g 1 i a p r ä p a r a t e (Zentralbl. f. allgem. Pathol. u. pathol. Anat. Bd. XVI, 1905, No. 15, p. 600—601). Die nach der WEiGERTSchen Methode angefertigten Neuroglia- präparate erscheinen nach einiger Zeit teils verwaschen , teils mehr oder weniger stark abgeblaßt. Das Celloidin, welches den Rand des Präparates umgibt und alle Lücken und Spalten etc. ausfüllt, liält bei der Differenzierung mit Anilin -Xylol den Farbstoff ziemlich zähe zurück, so daß immer Methylviolettreste im Präparate zurück- bleiben, die nicht an die Faser gebunden sind. Es scheint fast unmöglich zu sein, das Anilinöl aus dem mit Celloidin durchtränkten XXII 1, 2. Referate. 205 Präparate völlig mit Xylol auszuspülen, und so kommt es, daß Anilin- reste das am Celloidin haftende Methylviolett allmählich lösen. Der gelöste Farbstoff aber dringt in den Schnitt ein, und verwischt die Struktur. Diesen Nachteil kann man vermeiden , wenn man (nach Weigert) das Celloidin aus dem Präparat entfernt. So behandelte Präparate zeigen später kein verwaschenes Aussehen, verblassen aber dennoch, und zwar, wie Verf. annimmt, durch die Einwirkung redu- zierender Gase , wie sie in Laboratorien vorkommen (Leuchtgas, Formol, Schwefelwasserstoff etc.). Ganz analoge Erfahrungen hat Verf. mit GRAM-Färbungen gemacht: Deckglas- und Schnittpräi)arate, die sich in einem gasfreien Räume jahrelang unverändert erhalten hatten , waren nach mehrmonatigem Liegen im Laboratorium fast sämtlich verblaßt. Verf. rät daher Methylviolettfärbungen nicht im Laboratorium aufzubewahren. Man kann auch abgeblaßte Neuroglia- präparate wieder auffärben: Über einer ganz kleinen Spiritusflamme wird ganz allmählich der Kanadabalsam soweit verflüssigt, daß man, während der Objektträger noch über die Flamme gehalten wird, das Deckglas wegschieben kann , ohne das Präparat im geringsten zu schädigen; den Balsam entfernt man aus dem Schnitte mit Xylol vollständig (Einwirkung etwa 5 Minuten). Mit Oxalsäurealkohol, wie ihn Weigert zum Aufheben der Schnitte angegeben hat (0*5 Oxal- säure auf 100 TOprozentigen Alkohol), werden die Farbreste bis zur völligen Farblosigkeit ausgezogen, dann kann man von neuem färben. Bei der weitaus größten Mehrzahl der Schnitte gelingt so die Wieder- herstellung der Färbung auch sehr feiner Fasern. Schiefferdecker ( Bonn) . Hastiiii;-S, T. W., A mcthod for preparing a permanent Nociit's stain [Nociit- J enner stain] (Journ. of experiment. Med. vol. VII, 1905, no. 3, p. 265—278 w. 2 pl.). Die Möglichkeit, eine permanente Farbflüssigkeit nach den An- gaben von Nocht für seine Färbung herzustellen, war durch die Jenner sehe Färbung erwiesen. Verf. setzt auseinander, weshalb die bisherigen Färbungen nicht genügten, und teilt dann seine eigene Methode mit. Man braucht zwei Farbstoffe : das wasserlösliche gelb- liche Eosin (yellow eosin) von Grübler und das Ehrlich sehe rek- tifizierte Methylenblau (Grübler); aus diesem letzteren wird das polychrome Methylenblau in folgender Weise dargestellt. Man nehme von dem rektifizierten Methylenblau 2 g, von kohlensaurem Natrium 206 Referate. XXIII, 2. (trocknes Pulver) 2 g, von destilliertem Wasser 200 cc ; man löse das kohlensaure Natrium in heißem, destilliertem Wasser und streue das Methylenblaupulver hinein , lasse die Mischung leicht aufkochen in einer Abdampfschale auf einem Drahtgitter über der Flamme oder auf einem Wasserbade für 10 bis 15 Minuten; setze dann HO bis 40 cc destillierten Wassers auf je 100 cc der Lösung zu (also im ganzen 60 bis 80) , um das durch die Verdampfung verloren ge- gangene Wasser zu ersetzen, und erhitze dann noch weitere 10 bis 15 Minuten. Die heiße Lösung wird von dem Niederschlage ab- gegossen und zu 200 cc , falls nötig , mit destilliertem Wasser auf- gefüllt. Die Lösung muß dann durch Zusatz von 12"5- bis 20prozentiger Essigsäure teilweise neutralisiert werden. Man soll dabei die Hälfte der Methylenblaulösung erst mit Essigsäure behandeln , bis eine gut ausgesprochene Säurereaktion mit Lackmus erhalten wird (6 oder 7 cc der 12*5prozentigen Säure oder 3 bis 4 cc der 20prozentigen Säure auf 100 cc der Lösung) , und dann diese neutralisierte Portion mit der nicht neutralisierten Hälfte mischen , um so eine Überneutrali- sierung zu vermeiden. Die Endlösung soll alkalisch sein , da ein leichter Säureüberschuß schon die polychromen Eigenschaften zerstört, welche durch Zusatz von Alkalien nicht wiederhergestellt werden können. Um nun die Farblösung herzustellen, mischt man eine ein- prozentige wässerige Lösung des wasserlöslichen gelblichen Eosius (Grübler) mit einer frisch hergestellten polychromen Methyleublau- lösung und einer einprozentigen wässerigen Lösung des Ehrlich sehen rektifizierten Methylenblaus (GrIibler) zusammen. Man braucht dabei die frisch hergestellte Lösung des polychromen Methylenblaus nicht erst abzukühlen. Man führt die Mischung der Lösung in folgender Reihenfolge aus: A. destilliertes Wasser 1000 cc 5 B. einprozentige wässerige Eosinlösung 100 cc; C. polychrome Methylenblaulösung 200 cc; D. einprozentige wässerige Lösung des rektifizierten Methylen- blaus 70 cc. Eine grünlich metallisch schimmernde Schicht er- scheint auf der Oberfläche und ein feiner schwarzer Niederschlag sinkt zu Boden. Dieser Niederschlag erscheint erst, wenn 80 cc der Lösung D zugesetzt worden sind. Die Mischung wird sofort oder, nachdem sie 20 bis 30 Minuten lang gestanden hat, filtriert, den Niederschlag läßt man an der Luft trocknen (24 bis 48 Stunden) oder man trocknet ihn in einem Trockenapparate bei einer Tem- peratur, welche nicht höher als 60^ ist. Der getrocknete Nieder- schlag wird von dem Filtrierpapiere abgeschabt , in einem Mörser gepulvert und in reinem Methylalkohol gelöst. Aus der oben an- XXIII, 2. Referate. 207 gegebenen Lösnngsmenge erhält man etwa 0*7 bis 1 g Pulver; von diesem ergeben 0*25 bis 0'3 g mit 100 cc reinen Methylalkohols (Mergk) eine gesättigte Lösung. Um eine solche Lösung herbei- zuführen, muß man in einem Mörser mischen und das Pulver mit beträchtlicher Kraft zerbrechen ; eine intensiv blaue bis purpurrote Färbung des Mörsers und der Keule läßt erkennen, daß die Lösung geschehen ist. Mitunter zeigt der Methylalkohol einen Säuregehalt von 1 bis 2 cc N/lO Alkali auf 100 cc Alkohol; ein solcher Al- kohol muß erst mit O'Oö bis 0"1 g von trocknem kohlensaurem Natrium neutralisiert werden, bevor man ihn zur Lösung benutzt, da dieser Säuregehalt hinreichend ist , um eine Überneutralisierung zu ergeben. Eine solche aber zerstört die Fähigkeit , die Chromatin- körnchen zu färben, es tritt eine gleichmäßige Rotfärbung ein; eine ausgesprochene alkalische Reaktion (keine Neutralisierung vorhanden) verhindert ebenfalls die spezifische Färbung, da die roten Blutzellen und die Leukocyten undeutlich (blurred) und an den Ecken aus- gefranst erscheinen und gleichmäßig blau gefärbt sind. Hat die Farblösung die nötige Konzentration, so ist sie pflaumenfarbig (purple- plum) und läßt, wenn man sie geschüttelt hat, die Wand der Flasche über der Flüssigkeitsoberfläche klar. — Fixierung und Fär- bung. Wie bei der JENNERSchen Färbung, so ist auch hier eine Fixierung überflüssig. Die Blutschicht auf dem Deckglase oder auf dem Objektträger wird sorgfältig an der Luft getrocknet. Das Präparat wird mit der konzentrierten Farbflüssigkeit eine Minute lang Übergossen , dann verdünnt man mit wenigen Tropfen destillierten Wassers (5 bis 6 Tropfen auf ein Deckgläschen von 20 mm Seite), bis die metallische grünliche Oberflächenschicht auftritt imd man durch die verdünnte Farblösung an den Ecken des Deckglases hin- durchblicken kann, wenn das Präparat über eine weiße Oberfläche gehalten wird (Filtrierpapier). Die verdünnte Flüssigkeit bleibt auf dem Präparate 5 Minuten (Leishman), dann Abwaschen in destilliertem Wasser (2 bis 3 Sekunden) und sofortiges Trocknen mit Filtrier- papier. Für Malariapräparate genügt dieses Verfahren zur Färbung der jungen Formen. Zur Färbung der reifen Formen aber des Tertian- und Quartantypus und der Halbmonde des Sommer-Herbst- fiebers (aestivo-autumnal fever) muß die unverdünnte Lösung 2 Mi- nuten und die verdünnte 10 Minuten lang einwirken. Die normalen roten Blutkörperchen schwanken in einem gut ausgebreiteten Prä- parate von einem matten Hellrot bis zu einem stärkeren Eosinrot. Wird nach der Färbung von einer Minute die alkoholische Färb- 208 Referate. [XXIII, 2. flüssigkeit mit dem destillierten Wasser bei der Verdünnung nicht gründlich gemischt, so können die roten Blutkörperchen, namentlich an dickeren Stellen des Präparates , eine mehr bläuliche Färbung zeigen. Polychromatophilie und körnige Basophilie treten gut hervor. Die „Tüpfelung" (ScHtJFFNER, Rüge, Goldhorn), welche in vielen roten Zellen auftritt, die von Tertianparasiten eingenommen sind, zeigt eine deutlich verschiedene Färbung von der der basischen Kör- nung bei Anämie und Bleivergiftung. Die „Tüpfelung" variiert etwas mit der Art der Reaktion der Färbelösung, indem sie an Intensität und P^xtensität (d. h. in bezug auf Zellen, welche junge und solche, welche alte Parasiten enthalten) mit der Zunahme der Alkalinität der Färbeflüssigkeit zunimmt. Die „Tüpfelung" ist augenscheinlich eine spezifische Zelldegeneration. In allen Präparaten findet man in dem Protoplasma von vielen der mononukleären Formen (kleinen und großen) azurophile Körnchen. Der Farbenton der eosinophilen Körn- chen ist nicht so deutlich und glänzend wie bei anderen Färbungen (Eosin und Methylenblau, oder Jenner scher Färbung) und kann so jemand irre führen, der nicht mit Blutpräparaten genau Bescheid weiß. — Kernfärbung. Die Kerne der weißen und der kern- haltigen roten Blutkörperchen zeigen eine dunkle Pflaumenfarbe, die der Erythroblasten mehr eine dunkelblaue Farbe. Charakteristischer als dieser Farbenton ist die sehr deutliche Färbung des Chromatins. Die trachycliromatischen und amblychromatischen Kerne sind nicht gut unterschieden , doch ist das nach Ansicht des Verf. keine not- wendige Bedingung für eine gute Farblösung. Deutliche ambly- chromatische Kerne treten auf in Mastzellen und in Myelocyten. Die körnigen Leukocyten (die Bezeichnung „körnig" im ursprünglichen Sinne gebraucht) zeigen drei charakteristische Färbungserscheinuugen (Kern, Grundsubstanz des Protoplasmas und Körnchen). Die Grund- substanz der neutrophilen und der eosinophilen Zellen zeigt eine deutliche Rosafärbung und die Körnchen eine deutliche Rotfärbung, die Grundsubstanz der eosinophilen Zellen ist dabei stärker rot als die der neutrophilen. Die Mastzellen zeigen eine ungefärbte , weiße Gruudsubstanz, in der die intensiv violetten Körnchen liegen. Die tibergangsformen zeigen eine blau gefärbte Grundsubstanz , tiefer blau als das Blau der großen mononukleären Formen und heller blau als das Blau des Protoplasmas der Lymphocyteu , mit feinen über den blauen Grund zerstreuten Körnchen. — Basische Färbung. Im normalen Blute zeigen die Lymphocyten allein das tiefblaue Protoplasma, das charakteristisch ist für die Einwirkung eines ein- XXIIT, 2. Referate. 209 fachen blauen basischen Farbstoffes ; die Mastzellenkörnchen sind sowohl nietachromatisch wie deutlich basisch und variieren von einem tiefen Blau zu einem deutlichen Violett (purple) oder bis zu einem tiefroten Tone. Das Protoplasma der großen mononukleären Zellen reagiert schwach basisch , die Färbung variiert von einem sehr schwachen Blau bis zu einem deutlichen Hellblau. Im pathologischen Blute finden sich außer den normalen Lymphocyten zwei Zellformen mit stark sich färbendem , basischem , cyanophilem Protoplasma, die „Reizform''" (Stimulation form) von TtJRK und die „großen Lympho- cyten" oder „lymphoiden Knochenmarkzellen" der akuten „lym- phatisclien" Leukämie. Alle Myelocyten zeigen eine deutlich basisclie blaue Grundsubstanz und einige wenige von ihnen zeigen basische Körnchen ähnlich den Mastzellenkörnclien. — Neutrale Färbung. Die Körnchen der fein granulierten polynukleären Zellen zeigen eine weniger deutliche rote Farbe als die der eosinophilen Zellen, ein Rot mit einem Tone naeh Blau hin, niclit die violette oder lila Färbung, die so cliarakteristisch für andere gute neutrale Färbungen ist (Ehrlich, Jenner), so daß die Form und Größe der einzelnen Körnchen cliarakteristisclier für diese Zellformen sind als die Farbreaktion. — Azurfärbung. Die charakteristischste Eigenschaft ist die T'ärbung gewisser Körnchen in den großen mononukleären, den t'bergangs- zellen und in einigen Lymphocyten ähnlichen Zellen , die mit ein- fachen sauren, basischen und neutralen Farbstoffen (wie Ehrlich und Jenner) keine Körnung in dem Protoplasma zeigt. Dieselbe Reaktion findet sich bei gewissen Körnern in dem Protoplasma der „großen Lymphocyten" der akuten lymphatischen Leukämie. Ferner finden sich große mononukleäre Zellen mit und ohne diese „Azurkörnung". — Färbung der B 1 u t p 1 ä 1 1 c h e n. Mit Ansnahme der plättchen- ähnlichen Körper, die von den großen mononukleären und Übergangs- formen herstammen , zeigen die Blutplättchen besonders in den mit einer 2prozentigen Natrium- Metaphosphatlösung liergestellten Prä- paraten, einen schwach rosa gefärbten äußeren Hof, welcher eine schwach blau gefärbte innere Partie umgibt, in der sich ein tief rot gefärbtes stäbchenähnliches Netzwerk befindet. In den meisten Prä- paraten zeigen die zusammengehäuft liegenden Blutplättchen nur das tief rote Netzwerk, in denselben Präparaten aber zeigen zerstreut liegende Blutplättchen die eben beschriebene Erscheinung. — Chro- matinfärbung. Die Chromatinstoffe der Malariaparasiten zeigen die tief rubinrote Färbung, welche so charakteristisch ist für die Original-RoMANOwsKi-Färbung. Bei der NocHTSchen Methode ist in- ZeUschr. f. wiss. Mikroskopie. XXIII, 2. 14 210 Referate. XXIII, 2. dessen die Chromatinfiirbung weit sicherer als bei den Modifikationen der KoMANOwsKi sehen Methode (von Wright, Leishman). In den jüngeren Stadien ist die Chromatinfärbung intensiv und deutlich, wälirend bei den älteren ausgewachsenen Formen , den lialbniond- förinigen und ovoiden Formen (den Gametocyten), die Chromatin- stäbchen sich nur scliwach rot färben. Das Chromatin in den Kernen der Amoeba coli, der Trypanosomen und der Leishman-Donovan sehen Körper ähnelt dem der Malariaparasiten in bezug auf die P'ärbung. Schieff'erdecker {Bonn). 2. Präparationsmethoden für besondere Zwecke. A. Niedere Tiere. Koltzotf, N. K., Studien über die Gestalt der Zelle. 1. Untersuchungen über die Spermien der Üe- capoden, als Einleitung in das Problem der Zellgestalt (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXVII, 1906, p. 364—572 m. 37 Figg. u. 5 Tfin.). Von den versuchten Fixierungsflüssigkeiten gab Sublimat-Eisessig (5 Prozent Säure) und reines Sublimat die besten Resultate. Es kamen konzentrierte Lösungen in Süß- oder Seewasser , ferner eine Mischung beider oder endlich eine dem Seewasser isotonische Kon- zentration zur Verwendung. Plasmastrukturen und Zentralkörper wurden in allen Fällen fast immer brauchbar konserviert. Die Zell- form wird mit Zenker scher oder Boum scher Flüssigkeit besser er- lialten , und gelegentlich damit auch genügend gute Fixierung der Zentralkörper erzielt. Osmiumsäure enthaltende Gemische, wie z. B. das FLEMiMiNGSche und Hermann sehe, erwiesen sich für die vorliegen- den Zwecke als unbrauchbar. Die Chromatinstrukturcn wurden natür- lich mit ihnen immer sehr gut fixiert, nicht so aber die Zentralkörper und Mitochondrien. V^on Färbemethoden wurde hauptsächlich das IlEiDENHAiNSche P^isenliäniatoxylinvcrfahren angewandt, zum Teil mit Bordeauxrot- Vorfärbung, zum Teil auch in der Modifikation von Benda. Bei allen diesen Methoden ist aber nie sicher auf den gewünscliten Erfolg zu rechnen ; man ist genötigt , versuchsweise möglichst viele Objektträger mit kleinen Abänderungen im Färbeverfahren zu be- XXIII, 2. Referate. 211 arbeiten. Verf. erhielt aber gelegentlich tadellose Präparate, wo in bestimmten Stadien mir die Zentralkörper schwarz gefärbt, alle übrigen Teile der Zellen aber entfärbt waren. Für das Mitochondrienstudium dürfen natürlich die Präparate nicht bis zu diesem Grade ansgezogen werden. Öfters sind die Kerne der Zellen auf Hämatoxylinpräparaten ebenso intensiv gefärbt, wie die Mitochondrien und deshalb beider Grenzen oft nur sehr schwer festzustellen. Letzteres ist aber leicht durch Dreifachfärbung nach Biondi- Heidenhain zu erreichen, welche an Sublimatpräparaten immer gute Resultate gibt. Die Färbung der Mitochondrien durch Kristallviolett nach Benda gelang Verf. niclit, und zwar wahrscheinlich wegen der Unmöglichkeit mit Osmiumsäure oder Alkohol die vorliegenden Objekte brauchbar für die gegebenen Zwecke fixieren zu können. Aber auch in nachchromierten Sublimat- präparaten ergab die Färbung nicht die gewünschten Resultate. Außer Schnittpräparaten wurden noch Deckglaspräparate ganzer Spermien hergestellt. Zu diesem Zwecke wurde eine geringe Anzahl aus dem Testikel oder Receptaculum seminis entnommener Spermien in einem Tropfen Seewasser mehrere Minuten über Osmiumsäuredämpfen fixiert und dann nach Biondi -Heidenhain gefärbt oder nach Ranvier mit Goldchlorid-Ameisensäure vergoldet. Eisenhämatoxylin ergab hierfür keine befriedigenden Resultate. Endlich war es noch durchaus not- wendig, die Entwicklung an lebenden Zellen zu studieren, indem die Testikel in Serum , Seewasser oder isotonischer Lösung zerzupft wurden. E. Schoebel {Neapel). Gurwitsch , A. , Über die Zerstörbarkeit des Proto- plasmas im Echinodermenei. [Vorläufige Mitteilung.] (Anat. Anz. Bd. XX VH, 1905, No. 20, 21 m. 1 Fig.) Untersucht wurden Eier von Asterias glacialis, Strongylocentrotus lividus und Sphaerechinus granularis ; letztere schienen für die Ver- suche die geeignetsten zu sein. Zur Zerstörung des Eiprotoplasmas wurde eine Zentrifuge benutzt, die augeblich maximal 3000 Um- drehungen in der Minute leisten kann. Setzte man befruchtete oder unbefruchtete Echinodermeneier der Wirkung der Zentrifuge aus, so gelang es bei der in Betracht kommenden Umdrehungsgeschwindig- keit nicht eine irgendwie wahrnehmbare Veränderung ihrer Form oder ihres Plasmagefüges zu erzeugen ; allerdings konnte diese Hand- zentrifuge nicht länger als 10 Minuten in Bewegung gehalten werden (was für Froscheier vollständig genügte). Es war wahrscheinlich, daß dieser negative Ausfall darin seinen Grund hatte, daß die Unter- 14* 212 Referate. XXIII, 2. scliiede in dem spezifischen Gewichte bei den einzelnen Teilen des Echinodermeneies nur geringe waren, und so l()0 , so liegt der Ilämoglobin- gehalt zwischen 3 500 000 und 4 000 000. Diese Regel zeigt viel- fache -Ausnahmen. 3) Genügt zur Fixation eine Lösung von 1:400 oder weniger, so entspricht der Hämoglobingehalt 3 000 000 oder einer geringeren Zahl und die Zahl der Blutkörperchen 3 500 000 oder einer geringeren Zahl. SchiefferdecJcer (Bonn). Schridde, H., Die Darstellung der Le ukocy tenkörn e - lungen im Gewebe (Zentralbl. f. allgem. Pathol. u. pathol. Anat. Bd. XVI, 1905, No. 19, p. 770—771). Verf. liat vor kurzem über eine exakte Darstellung der neutro- philen Leukocytengranulationen in lebenswarni fixiertem Materiale berichtet (Anat. Hefte, 1905, H. 85, 86), da man aber nur in den seltensten Fällen in die Lage kommt, menschliche Untersuchuugs- ') Vgl. diese Zeltschr. Bd. XXllI, U>UG, p. 83. 214 Referate. XXIII, 2. ohjekte lebensfrisch zu fixieren, so war die Methode für die Praxis nicht geeignet. In vorliegender Arbeit teilt Verf. eine Methode mit, die auch an Leichenmaterial eine vorzügliche und sichere Darstellung sämtlicher Leukocytenkörneliingen ermöglicht. Fixierung am besten in Formol -MüLLEK, jedoch gibt auch jede andere Fixierung gute Resultate. Die Paraffinschnitte (nicht dicker als 5/0 werden mit Wasser auf dem mit einer sehr dünnen Lage von Eiweißglyzerin be- strichenen Objektträger in bekannter Weise fixiert und kommen auf 20 Minuten in die Farblösung (2 Tropfen der von Grübler für diesen Zweck hergestellten GiEMSA-Lösung auf je 1 cc Wasser. Die Farblösung muß jedesmal frisch hergestellt werden). Sehr sorg- fältiges Auswaschen in Wasser , kurzes Abtrocknen mit Fließpapier, sofortiges Überführen in Aceton, welchem, um es lange Zeit wasser- frei zu halten, geglühtes Kupfersulfat zugesetzt ist. Gewöhnlich genügt ein Verweilen von einer Minute und darunter im Aceton, um die Schnitte vollkommen wasserfrei zu machen. Man muß dabei be- obachten, ob im Aceton eine Entfärbung der Präparate eintritt, da dann sicher Säure vorhanden ist. Aus dem Aceton direkt in säure- freies Toluol oder Xylol , Einschluß in neutralem Kanadabalsam (Kanadabalsam rect. neutr. „Grübler"). Die fertigen Präparate werden im Dunkeln aufbewahrt. Sclilefferdecker [Boini). Arnold, J., Die Morphologie der Milch- u n d C o 1 o s t r u m - Sekretion, sowie deren Beziehung z u r F e 1 1 - Synthese, F e 1 1 p h a g o c y t o s e , L' e 1 1 s e k r e t i o n und Fettdegeneration (Beitr. z. pathol. Anat. u. z. allgem. Pathol. Bd! XXXVIII, p. 421—448 m. 1 TU.). Es wurden Mammae aus dem siebenten und achten Monate der Gravidität und verschieden langer Zeit nach erfolgter Geburt unter- sucht. Es wurde nur Material benutzt, welches wenige Stunden nach dem Tode konserviert werden konnte. Kuheuter wurden sofort nach der Schlachtung des Tieres konserviert, laktierende Mammae von Ratten (2, 4, G und 8 Tage, nachdem sie geworfen hatten), wurden möglichst vorsichtig den eben getöteten Tieren entnommen und in die Konservierungstlüssigkeit eingelegt. Man soll sich bei einer solchen Untersuchung nicht auf die Mammae kleiner Nager (Maus, Ratte, Meerschweinchen), beschränken, da manche Verhältnisse an anderen Mammae (Frau, Kuh), leichter zu ermitteln sind. Die Untersuchung von lebendem bczw. überlebendem Materiale unter Zusatz von Serum, indifferenten Kochsalz- sowie Neutralrotkochsalzlösungen ist für das XXIII, 2. Referate. 215 Stiuliiim der Protoplasniastrukturen selir zu empfelilen. Nicht zu entbelireii ist die Anfertigiuig- möglichst feiner Gefriersclinitte von in Forraol gehärteten Präparaten und die Färbung dieser mit Hämat- oxylin und Sudan nach dem bekannten Verfahren. Keine andere Methode ergibt eine so sichere Färbung der feinsten Fettgranula. Man kann solche Schnitte aucli nachträglich mit ]\[AU(jiiisc]ier Flüssiü- keit 24 bis 48 Stunden im Brutofen beliandeln. Die Fettfärbung ist dann gleichfalls eine ziemlich vollständige, dagegen ist die Kern- färbung schwierig. Viele bisherige Fehlerfolge und Meinungs- verschiedenheiten lassen sich auf mangelhafte oder unterlassene Fett- reaktion zurückführen. Sehr wichtig ist ferner die Härtung in Subli- mat und MtJLLER-Sublimat. Kleinere und dünne Stücke solcher Objekte kann man dann noch mit jMAiiom scher Flüssigkeit fl4 Tage im Brütofen) nachbehandeln. Färbung mit Eisenhämatoxylin (Heidenhain und Sobotta), den Dreifarbengemischen von Heidenhain, Biondi und PiANESE. Zum Studium der Kerne eignen sich Präparate , die in starke FLEMMiNGSche Lösung 24 Stunden oder länger eingelegt waren; auch die von Siuiulze angegebene Mischung und Färbungsmethode ist empfehlenswert. Das Färbungsverfahren war dasselbe, wie beim Sublimatpräparate. Die Fettfärbung ist bei beiden Mischungen un- genügend , da sie nur an den Randteilen eintritt, die größeren Fett- tropfen oft nur unvollständig gefärbt sind, und die kleineren bei der nachfolgenden Behandlung mit Alkohol und Xylol wieder verschwinden. Besseres leistet in dieser Hinsicht die Methode von Altmann, die ja auch wegen der Granulafärbung nicht zu entbehren ist. — Zur Iso- lierung der Plasmosomen und Granula empfiehlt Verf. außer der Jodkali-Eosinmethode das folgende Verfahren : feine Schabsei der Mamma werden mit Marciii scher oder Schultze scher Flüssigkeit Übergossen und im Brütofen mindestens 48 Stunden in einem gut schließenden Glase der Einwirkung dieser ausgesetzt; dann fängt man kleine Gewebsteilchen mit der Platinöse auf .und bringt sie für 24 Stunden in eine Mischung von Salzsäurealkohol (Salzsäure 1 auf 100 öOprozentigen Alkohols), der einige Tropfen konzentrierter wässeriger Säurefuchsinlösung (5 Tropfen auf 10 cc) hinzugefügt werden. Nach intensiver Färbung zerzupft man in Glyzerin. In den so hergestellten Prä])araten, welche in jedem Falle gelingen, da die eine sehr große Unsicherheit bedingende Dift'erenzierung vollkommen fehlt , erscheinen die neutrophilen Granula in einem violettroten Farbentone. Die eosinophilen Körnelungen sind rot, manchmal leicht schmutzigrot, und die Mastzellenkörncr tief dunkelblau gefärbt. Die 21 G Referate. XXIII, 2. Kerne sämtlicher farbloser Blutzellen und ebenso die aller fixer Ge- webszellen sind vorzüglich blau gefärbt. Die roten Blutkörperchen erscheinen grasgrün , das Bindegewebe blaßrötlich. Man kann also mit der beschriebenen Methode bei jeder Fixierung sämtliche Körne- lungen der Leukocyten im Gewebe gut difierenziert darstellen und die Anwendung ist einfach und absolut sicher. Schiefferdecker (Bonn). Stromsteil, F. A., A contribution to the anatomy and development of the venous System of Chelonia (Amer. Journ. Anat. vol. IV, 1905, no. 4, p. 453 — 483 w. 12 figg.). Die Schildkröten wurden durch Chloralhydrat getötet und von der linken Abdominalvene aus injiziert. Chloralhydrat wurde Äther und Chloroform vorgezogen , weil es die Tiere in gestrecktem Zu- stande bewahrt und Muskelkontraktionen verhindert. Am besten gelangen die Injektionen einige Tage nach dem Tode des Tieres. Gewöhnlich wurde eine Gelatinemasse verwendet und das Tier wurde einige Minuten vor der Injektion in warmem Wasser angewärmt. Erniedrigt man durch Zusatz von Jodkalium den Schmelzpunkt der Gelatine , so ist die Erwärmung des Tieres nicht nötig. Um die Beziehungen der Lebervenen und der Nierenvenen genau zu unter- suchen, wurde die Wachsmasse von Huntington injiziert und das Präparat mit konzentrierter käuflicher Salzsäure korrodiert. Fixiert wurde in Pikrinsäure- Sublimatlösung oder in Pikrinsäure - Salpeter- säure. Das Pikrinsäure- Sublimatmaterial war sowohl gut fixiert wie zur Färbung geeignet, das Pikrinsäure-Salpetersäurematerial war nicht gut. Die Embryonen wurden in Paraffin eingebettet und in Serien- schnitte von 20 fi Dicke zerlegt. Die Färbung gelang am besten mit Hämatoxylin (Delafield) und Pikrinsäure. Nach Fixierung in Pikrinsäuresublimat treten bei dieser Färbung die Blutgefäße sehr deutlich hervor. Schiefferdecker (Bonn). dardner , M. , Notizen über die Bildung des Knochen- gewebes. Vorläufige Mitteilung (Le Physiologiste Russe, 1905, No. G8 — 73, p. 3 — 27 m. 1 Tfi.). Untersucht wurden Embryonen und junge Individuen von Axolotl, Hund, Katze, Schaf, Schwein, menschliche Embryonen, Knochen von Kälbern , Ochsen , Menschen , das Operculum des Kiemenapparates und Fischschuppen. Fixiert wurde mit Alkohol , Formol , Osmium- XXIII, 2. Referate. 217 säure, Pikrinsäure, Sublimat nach Heidenhain, Flemming scher und Hermann scher Flüssigkeit. Gefärbt wurde mit verschiedenen Kom- binationen von Ahamkarmin, Safranin, Thionin, Pikrinsäure, Bleu de Lyon und der Miochuny von Calleja. Zur Aufdeckung der feineren Struktur der Knoclien an entkalkten Präparaten ist besonders ge- eignet die Entkalkung und Fixierung mit Pikrinsäure mit darauf- fulgender Behandlung nach jener Methode von Wülteks, die zur elektiven Färbung des elastischen Gewebes vorgeschlagen wurde. Hierzu ist sie allerdings nicht geeignet, für die Erforschung des leimgebendeu Gewebes, des Knorpels und des Knochens liefert sie aber sehr schöne und genaue Bilder , die an gute, feine Stahlstiche erinnern. Da diese Methode auf der Bildung von Hämatoxylinlack mit Chlorvanadium beruht , so muß die nachfolgende Differenzierung durch Eisensesquichlorid besonders aufmerksam unter der Kontrolle des Mikroskops ausgeführt werden. Es hängt somit das Gelingen oder Nichtgelingen des Präparats nicht mehr von der Methode, son- dern in jedem einzelnen Falle gänzlich von der Geschicklichkeit des LIntersuchers ab. Unter den andern Entkalkungsmethoden verdient die Behandlung mit Salpetersäure und Phloroglucin den Vorzug, da nach ihr alle kombinierten Färbungen ausgezeichnete Bilder liefern, jedenfalls viel bessere als bei Benutzung anderer Entkalkungsmittel. — Die Lösung vieler mit der Knochenbildung verbundener Fragen erfordert zweifellos Entkalkung des Knochens. Verf. ist indessen der Meinung, daß die Untersucher eine solche häufiger anwenden als nötig ist. Man darf nach ihm nicht vergessen, daß bei der Entwicklung des Knochens die Bildung der weichen Grundsubstanz mit der Imprägnierung derselben mit festen Substanzen Hand in Hand geht ; deshalb dürften die volleren Bilder an nicht entkalkten Präparaten das kleine Opfer einiger verdorbener Rasiermesser wohl aufwiegen. An solchen unentkalkten Schnitten erhielt Verf. im Sinne optischer Difterenzierung der Gewebe die besten Resultate mit Safranin und gutem Alaunkarmin, Thionin und Pikrinsäure. Schieffenleclier {Bonn). Maximow, A., Über die Z e 1 1 f o r m e u des lockeren Binde- gewebes (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXVII, 190G, p. 680—757 m. 3 Ttln.). Für die Untersuchung war es notwendig, außer dem eigentlichen lockeren Bindegewebe, wie es sich unter der Haut, zwischen den Muskeln und andern Organen findet , auch die serösen Häute , das 218 Referate. XXIII, 2. Netz , das Mesenterium und das interstitielle Gewebe verschiedener Drüsen zu untersuchen; schließlich waren auch das Blut und die blutbildenden Organe zu l)erücksichtigen. Die Untersuchung geschah teils an frischem , teils an verschieden fixiertem Material. Bei der Untersuchung eines frischen ungefärbten Fetzens des lockeren Binde- gewebes unter dem Mikroskop ohne Zusatzfliissigkeit ist nur sehr wenig zu beobacliten ; besser ist es, wenn man nach Ranvier durch Injektion von physiologischer Kochsalzlösung ein lokales Ödem er- zeugt und das ödematöse Gewebe untersucht. So gelingt es meist bei einiger Übung, die verschiedenen Zellformen zu unterscheiden. Sehr gute Resultate ergibt aber diese Methode in der Kombination mit sogenannter vitaler (besser aber als supravital zu bezeichnender) Färbung. Methylenblau gibt aber für den vorliegenden Zweck nur wenig deutliche Bilder und deshalb ist vor allem Neutralrot vor- zuziehen. Die Anwendung ist äußerst einfach. Man stellt eine gesättigte Lösung des Farbstortes in physiologischer Kochsalzlösung her und einem eben getöteten Tier wird an einer beliebigen Stelle ein Haut- lappen abpräpariert. Nun werden mittels Pravaz- Spritze , deren Kanüle man schräg unter den bloßgelegteu Muskel einsticht, etwa 0"5 cc der Lösung in das intermuskuläre Bindegewebe eingespritzt. Es bildet sich eine Ödembeule. Nach einer bis 2 Minuten wird an der Kuppe derselben die Muskelschicht mit einem Scherenschnitt ab- getragen und ein kleines Stück der roten geleeartigen Masse des öderaatösen Bindegewebes herausgeschnitten , auf einen Objektträger für einige Sekunden in einen kleinen Tropfen frischer Neutralrot- Lösung gebracht und nachdem letzterer entfernt ist, mit einem Deck- glas bedeckt. Zerzupfen mit Nadeln ist nur bei Vorhandensein größerer Fettläppchen nötig, sonst aber im allgemeinen sogar schädlich, da dabei viele Zellen mechanisch verletzt werden. Die Untersuchung solcher Präparate ist nicht notwendigerweise auf heizbarem Objekt- tisch vorzunehmen , da die gefärbten zelligen Elemente sich auch ziemlich lange bei gewöhnlicher Zimmertemperatur halten. Um brauch- bare fixierte Präparate zu erhalten, ist es nicht angängig, einfache Gewebsstücke auszuschneiden und dieselben in die FixierungsHüssig- keit zu bringen. Man muß vielmehr vom intermuskulären Binde- gewebe und dünnen Membranen die zu fixierenden Stücke an Ort und Stelle aufspannen, z.B. auf Kork oder dergl., und in diesem Zustande in das Reagenz bringen. Zum Studium der blutbildenden Organe wurden hauptsächlich Deckglaspräparate angefertigt, und zwar meist derart, daß das in dünner Schicht auf das Deckglas ge- XXIII, 2. Referate. 219 brachte frische Gewebe (Bhit, Knochenmark etc.) sofort fixiert und dann wie Schnitte weiter behandelt wurde. Trockene Präparate sind weniger zu empfehlen. — Als FixierungsHüssigkeiten kamen zur Ver- wendung absoluter Alkohol, warme Zenker sehe Flüssigkeit, ferner die von Hellv empfohlene Mischung (ZENKERSche Flüssigkeit, in der die Essigsäure durch käufliches Formol ersetzt ist) ; dünne Membranen und Deckglaspräparate wurden in letzterer 20 bis 30 Minuten, Ge- websstücke 4 Stunden fixiert. Die von Dominici beschriebene Methode (Jod -\- Sublimat -|- Formol) zur Untersuchung des Bindegewebes gibt recht gut die Zellformen wieder, vor allem der ruhenden Wander- zellen. Mehr zu sehen , als die andern vom Verf. angewendeten Methoden erlaubt sie aber auch nicht. Übrigens treten aber die Centrosomen viel schlechter hervor, die Mastzelleiüvörner bleiben lös- lich, so daß sie nach der Färbung von metachromatischen Höfen umgeben erscheinen und im Protoplasma der ruhenden Wanderzellen tritt oft starke , zum Teil wohl sicher künstliche Vakuolisierung ein. P^ingebettet wurde teils in Celloidin, teils in Paraffin. Zur Färbung diente polychromes Methylenblau nach Unna, Eisenhämatoxylin nach Heidenhain, eventuell mit van Gieson scher Nachfärbung und Verf.'s Hämatoxylin-Fuchsin S-Aurantia-Methode. Zum Studium der Mastzellen und vor allem zum sicheren Nachweis derselben ist es unbedingt not- wendig, auf das sorgfältigste jede Berührung des Präparates mit Wasser oder wässerigen Lösungen zu vermeiden. Celloidinschnitte von Alkoholinaterial oder mit Alkohol fixierte Deckglaspräparate, resp. Membranen müssen infolgedessen in gesättigter Thioninlösung in 50- prozentigem Alkohol gefärbt werden. Es ist vorteilhaft die Färbe- dauer bis zu 24 , selbst 48 Stunden auszudehnen. Bei den mit Zenker -Formol fixierten Präparaten geben zwar auch Methylenblau und Eisenhämatoxylin ganz gute Färbungen, besonders zweckmäßig sind aber die Granulafärbungen mit Triacid nach Arnold und mit Eosin-Azurblau nach Nocht. Auch Celloidinschnitte können damit gefärbt werden, nur muß das Celloidin vorher mit Alkoholäther ent- fernt werden. Die Färbungsdauer mit Eosin-Azurblau betrug 2 bis 12 Stunden; die Azurlösung darf aber nicht älter als 2 bis 3 Wochen sein. E. Schoebel {Neapel). Gluyot, G., Über das Verhalten der elastischen Fasern bei A 1 e u r n a t p 1 e u r i t i s. Ein Beitrag zur II i s t o - genese der elastischen Fasern (Beitr. z. i)atli(»l. Anat. u. z. allgem. Pathol. Bd. XXXVHI, 1905, H. 1, p. 221— 228j. 220 Referate. XXlII, 2. Gelegentlich seiner experimentellen Untersuchungen über die Beteiligung der Lymphgefäße an der entzündlichen Bindegewebs- neubildung auf der Pleura hat Verf. auch die elastischen Fasern der Pleura genauer untersucht, da die elastische Grenzlanielle der Serosa eine vorzügliche Grenzmarke bildet, um sich über die Beziehungen der Serosa zu den auf derselben sich entwickelnden Granulations- wucherungen zu orientieren. Zur Erzeugung einer Pleuritis wurde eine in Dampf sterilisierte lOprozentige Emulsion von Aleuronat in physiologischer Kochsalzlösung in die Pleurahöhle von Kaninchen eingespritzt fje nach der Größe 3 bis 4 cc). Bei der Obduktion wurden die Aleuronatauflagerungen im Zusammenhange mit der ent- sprechenden Pleura, wenn nötig, auch mit dem anliegenden Gewebe aufgehoben und in üblicher Weise fixiert und eingebettet. Zur Unter- suchung der elastischen Fasern wurden die in Alkohol und Formol fixierten und in Paraffin (nach der Heidenhain sehen SchwefelkohlenstofF- methode) eingebetteten Stücke ausgewählt. Die Celloidinpräparate eignen sich weit weniger , da das Celloidin sich mit den zur Dar- stellung der elastischen Fasern angewandten Farbstoften sehr intensiv färbt. Auch das Aleuronat färbt sich intensiv mit den zur Dar- stellung der elastischen Fasern gebrauchten Methoden und hält die Farbe so fest, daß die gewöhnliche Difterenzierung in 0"5- bis ein- prozentigem Salzsäurealkohol so gut wie erfolglos bleibt. Die Difte- renzierung gelingt dagegen sehr gut mit Pikrinsäure in verdünnten Lösungen. Das folgende Verfahren erwies sich als sehr gut : 12- bis 24stündige Färbung in der nach Pranter^ hergestellten ?]lastica- Orceinlösung; Diff"erenzierung in 0"5prozentigem Salzsäurealkohol ; Aus- waschen ; starke Hämatoxylinfärbung 5 zweite Dift"erenzierung in einer 0'5prozentigen Lösung von Pikrinsäure in Leitungswasser mit even- tuellem Zusätze von einem Tropfen Ammoniak unter mikroskopischer Kontrolle bis zur vollständigen Entfärbung resp. Gelbfärbung des Aleuronates ; sorgfältiges Auswaschen in Alkohol , dann absoluter Alkohol , Xylol , Balsam : Elastische Fasern dunkelrot , Kerne blau- schwarz , Bindegewebsfasern , Protoplasma und Aleuronat gelb. Die Präparate sind nicht lange haltbar (Entfärbung durch die noch vor- handene Pikrinsäure). Zur Kontrolle wurden die bekannten Methoden von Weigert und von Unna -Tänzer benutzt. Schieferdecker {Bonn). ^) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 3G1— 3G4. XXIII, 2. Referate. 221 Stern, S., Über Selipurpurfixation (Arch. f. Oplitlialmol. F.d. LXI, 1905, H. 3, p. 561—563). Verf. hat versucht, den Selipurpur so zu fixieren, daß er auch auf Schnitten nachweisbar war. Fixierung- in Sublimat gibt dem Sehpurpur eine durch Licht fast unvcrwiistliclie gelbe Farbe, welche aber durch die Behandlung mit Alkohol-Xylol-Paraffin zerstört wurde. Auf Grund früherer Versuche von Embden wählte Verf. jetzt eine Fixierung mit Platinchlorid: ein Frosch wurde 2 Stunden im Dunklen gehalten (nach dieser Zeit maximale Purpurbildung nach Kühne) , dann in der Dunkelkammer bei rotem Lichte durch De- kapitation getötet, die Augen, die der leichteren Handhabung wegen mit den Orbitalknochen in Verbindung blieben , wurden durch Ab- tragung der vordem Bulbushälfte eröffnet und die Linse heraus- genommen. Die so präparierten Augen kamen in eine Platinchlorid- lösung (am besten 2'5prozentig, doch können auch lOprozentige oder bis 0'5prozentige Lösungen angewendet werden) für 12 bis 14 Stunden. Nach Entfernung der Orbitalknochen Entwässerung in absolutem Alkohol, Xylol, Paraffineinbettung. Auf Schnitten (10 bis 20//) sind die Aulknglieder der Stäbchen intensiv orange gefärbt; Färbung fast unempfindlich gegen Licht. Im Gegensatze zur Fixierung in Sublimat ergibt also diese Methode eine stärkere Färbung und verträgt die Nachbehandlung gut. Ob das Platinchlorid den Seh- purpur chemisch bindet oder indirekt auf den Farbstoft' einwirkt, läßt Verf. unentschieden. Bei Kaninchen und Katze waren die Re- sultate ebensogut. Schiefferdecker {Bonn). Cavalie, M., Sur quelques points de la structure de l'organe electrique [Torpedo Galvani] (C. Pt. Soc. Biol. t. LVIII, 1905, no. 3, p. 158—160). Verf. versuchte nachzuweisen , ob die Nervenverästelung aus der ventralen Schicht der elektrischen Plättchen .auch noch in die mittlere, eventuell in die dorsale Schicht einträte, und ob hieran auch die Scheidennerven beteiligt wären. P^ine gute Fixierung ist schwer zu erhalten ; die besten Resultate ergaben : absoluter Alkohol, gesättigte wässerige Sublimatlösung (heiß), ein- bis 2prozentige Osmium- säurelösung. Interstitielle Injektionen verbunden mit Einlegen sind sehr nützlich. Färbung auf dem Objektträger mit Safranin-Pikrin- säure, Hämatoxylin-Eosin , Eisenhämatoxyliu, Imprägnation mit Gold- chlorid nach DE Nabias. Schiefferdecker (Bonn). 222 Referate. XXIII, 2. Beiling, K., Beiträge zur makroskopischen und mikro- skopischen Anatomie der Vagiua und des Uterus der Säugetiere (Arch. f. mihrosk. Anat. Bd. LXVn, 1906, p. 573—637 m. 1 Tfl.). Die Fixierung erfolgte in konzentrierter Sublimat- oder 5pro- zentiger Kaliumbichromatlösung ; die Einbettung meist in ParafHn. Selbst stark muskulöse uteri sind nach Verf. gut zu schneiden, wenn man in weiches Paraffin (48 bis 50^ C. Schmelzpunkt) ein- bettet und im warmen Zimmer mit schräg gestelltem Messer schneidet. Gefärbt wurde meist mit Hämatoxvlin, Pikrokarmin und verschiedenen Schleimfarben. E. Schocbel (Neapel). Cesa-Bianchi, D., Über das Vorkommen besonderer Ge- bilde in den Feiern mancher Säugetiere (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXVII, 1006, p. 647—679 m. 1 Tfl.). Zur Untersuchung eignet sich vor allem das Ovarium der Hündin, es ist aber unbedingt nötig, absolut frisches Material zu verwenden. Als Fixierungsmittel eignen sich besonders Sublimat in wässeriger Lösung mit Zusatz von Essigsäure , ferner ZENKERSche Flüssigkeit und osmiumsäurehaltige Gemische (Flemming, Hermann), obwohl mit diesen letzteren die fraglichen Gebilde wegen der zahlreichen im Dotter enthaltenen, mit Osmium sich schwarzfärbenden Fetttröpfchen nicht so deutlich ausfallen. Zur Färbung der Schnitte leisten wohl alle üblichen Farbstoffe gute Dienste. (Hämatoxylin , Hämalaun, Carmalaun, und als Kontrastfarben : Eosin , Orange , Aurantia u. a.) Sehr gute Resultate, namentlich bezüglich der Darstellung des Zentral- kerns, liefert Heidenhains Eisenhämatoxylin ; minder gute Safranin. Als sehr geeignet erweist sich ferner die Dreifachfärbung Ehrlich- Biondi-Heidenhajn. Recht anschauliche, aber wenig dauerhafte Prä- parate erhält man schließlich auch noch mit Manns Methylenblau- Eosin-Methode. Übrigens kann man , Avenn die in Rede stehenden Gebilde in den Eiern in reichlicher Anzahl vorhanden sind, dieselben auch ohne irgendeine Färbung, durch einfache Untersuchung der vom Paraffin befreiten Schnitte, an der eigentümlichen Lichtbrechung ihres Zentralkerns erkennen. E. Schoebel {Neapel}. Hendrich, A., Vergleichende makroskopische und mikro- skopische U n t e r s u eil u n g e n über die Samen- blasen und die Ampullen der Samenleiter bei den Haussäugetieren, mitEinschluß vonHirsch XXIII, 2. Referate. 223 und Reh bock (Internat. Monatsschr. f. Anat. u. Physiol. Bd. XXII, 1905, H. 10—12, p. .360—408 m. 2 Tfln.). Die Geschlechtsorgane wurden nach dem Tode des Tieres mög- lichst schnell herausgenommen. Es wurden aus verschiedenen Stellen der noch lebenswarmen Organe kleine Würfel von nicht mehr als .5 mm Seite herausgeschnitten und in die Fixierungsflüssigkeit ge- bracht. Neben einer heißgesättigten Sublimat -Kochsalzlösung mit Zusatz von etwas Eisessig machte Verf. noch zahlreiche Versuche mit der bei weitem kürzeren Methode der Formollösung nach Kitt (Formol 200-0; dest. Wasser 1000*0 5 Kai. nitric. 1.5'0; Kai. acetic. 30-0). Während die Sublimatmethode durchweg ausgezeichnete Re- sultate ergab, hatte die KixTSche Methode absolut nicht den ge- wünschten Erfolg. Einbettung in Paraffin oder Celloidin. Färbung meist mit Hämatoxylin und Eosin ; für die Muskulatur und das Binde- gewebe mit der Lösung von van Gieson oder mit Pikrokarmin; für elastische Elemente mit Fuchsin -Resorcin mit gleichzeitiger Kern- färbung durch einen andern Farbstoff; für Schleim mit Hämatoxylin (Delafield), Mucikarmin und Bismarckbraun (bei den letzten beiden Farbstoffen Vorfärbnng mit Hämalaun). Zur Entscheidung der Frage, ob Sekretkapillaren vorhanden sind , wurden die Schnitte mit P>isen- alaun- Hämatoxylin (M. Heidenhain) gefärbt. Hierbei auch öfter Nachfärbung mit Erythrosin oder Rubin S. Seh iefferdeeker ( Bo}in) . Völker, 0., Über die Histogenese des Corpus luteum beim Ziesel [Sp ermoph i lus cit.] (Arch. f. Anat. u. - Physiol., Anat. Abt., 1905, H. 4, p. 301—320 m. 2 Tfln.j. Es wurden viele Zieselweibchen während der Brunstzeit ge- tötet (Äther oder Chloroform). Die herausgenommenen Uteri kamen sofort oder nach sehr kurzer Zeit in die Fixierungsflüssigkeit : Forraol, Sublimat und Pikrinsäure in verschiedenen Mischungen ; am besten bewährte sich eine Mischung aus gleichen Teilen konzentrierter Sublimatlösuug und konzentrierter Pikrinsäurelösung mit Zusatz von 5 Prozent Acidum aceticum glaciale. Dauer der Fixierung bis zu 24 Stunden, später tritt Schrumpfung ein, dann steigender Alkohol von TOprozentigem bis zu absolutem Alkohol, Celloidineinbettung. Die Formolpräparate wurden im ganzen mit Alauncochenille durchgefärbt, bei deu andern Fixierungen wurden die auf Glas aufgeklebten Serien- schnitte hauptsächlich nach van Giesox, zum Teile auch mit Hämat- oxylin gefärbt. Die Methode nach van Gieson bewährte sich nur, 224 Referate. XXIII, 2. wenn die nach der ursprünglichen Vorschrift hergestellte Flüssigkeit vielfach mit Wasser verdünnt wurde, und wenn zu dieser verdünnten Lösung Pikrinsäure fast bis zur Sättigung zugesetzt Avurde. Die stark mit Häraatoxylin gefärbten Serien wurden in dieser so zubereiteten Flüssigkeit gewöhnlich 10 Minuten gefärbt, sie können in ihr aber auch eine beliebige Zeit verweilen. Schiefferdecker (Bonn). C. Baktei'ien, Günther, C, Einführung in das Studium der Bakterio- logie mit besonderer Berücksichtigung der mikroskopischen Technik. Für Arzte und Studie- rende der Medizin. 6. vermehrte und verbesserte Auflage. Mit 93 vom Verfasser hergestellten Photogrammen. Leipzig (G. Thieme) 1906. XII u. 906 pp., 15 Tfln. Preis M. 13-—. Nach achtjähriger Pause erscheint Günthers Lehrbuch abermals in neuer Auflage. Die kurzgefaßte Einführung in das praktische Studium der Bakterienwissenschaft, die Verf. geben will, stellt gleich- zeitig ein umfangreiches Nachschlagewerk dar , das namentlich den Interessen der Mediziner zu dienen berufen ist: mit besonderer Aus- führlichkeit werden die pathogenen Mikroorganismen behandelt. Die mustergültige Klarheit der Darstellung , die das ganze Werk aus- zeichnet, macht auch das uns besonders interessierende Kapitel, das von der mikroskopischen Technik handelt, besonders wertvoll. Sehr eingehend — auch für den Anfänger verständlich — ist die Schil- derung der verschiedenen Färbungs- und Fixierungsmethoden , mit der Verf. übrigens nicht nur zur Kenntnis der verschiedenen Ver- fahren, sondern auch zu deren wissenschaftlichem Verständnis anleitet. Dasselbe gilt für den Abschnitt, welcher die Methoden der Bakterien- züchtung behandelt; auf diese kommt Verf. auch im speziellen Teil — bei Besprechung der Typhusbakterien u. a. — unter Berücksichtigung der neuesten Literatur zurück. — Besonders mag noch des ausführlichen Registers und der vor- trefflichen Photogramme gedacht sein. Küster (Halle a. S.). Berger, F. ß. M., Zur Färbung der Spirochaete pallida (Münch. med. Wochenschr. 1906, No. 25, p. 1209). XXIII, 2. Referate. 225 Die Färbetechnik zur Darstellung der Schaudixk-Hoffmann sehen Spirochaete pallida ist eine vielseitige, und jetzt noch kommen Modi- fikationen und Yerbesseruugen zur Kenntnis. Der Verf. erkannte in Dahlia ein sehr gutes Färbemittel für die Spirochaete pallida. Seine Vorschrift ist ungefähr folgende : Mau verdünnt 4 cc konzentrierter alkoholischer Dahlialösung mit 20 cc Aq. destill. Die möglichst dünnen Ausstriche werden 5 bis 10 Minuten lang in absolutem Alkohol fixiert und dann getrocknet. Es folgt Vorbehandlung mit einigen Tropfen Azur II -Lösung (nach Giemsa) eine Minute lang, Abspülen mit Leitungswasser, Abtrocknen, kurzes Durchziehen durch die Flamme. Darauf gibt man auf das Präparat einige Tropfen der obigen wässerig -alkoholischen DahUa- lösung während 3 bis 5 Minuten ; weiter Abspülen in Leitungswasser, Abtrocknen, kurzes Durchziehen durch die Flamme, neutraler Kanada- balsam. Da die roten Blutkörperchen in dünnen Ausstrichen hell bleiben, braucht man bei dieser Färbung nicht so ängstlich die Anwesenheit derselben im Präparat zu vermeiden. Die Wirkung einer wässerig- alkoholischen Lösung von Gentianaviolett in derselben Konzentration ist bei der gleichen Anweudungsart dieselbe, nur fällt die Färbung etwas dunkler aus. Neben der guten Darstellung der Pallida sollen durch diese Färbemethode störende Niederschläge ganz vermieden werden. W. Hoffmann {Berlin). Reuschel, Fr., Die einfachste Method